Langsung RT-qPCR Kit II
Deskripsi Kit:
◮Direct RT-qPCR Kit, nggunakake Foreasy Reverse Transcriptase lan Foreasy HS Taq DNA Polymerase ngembangaken dening Foregene, karo reaksi buffer unik, ndadekake kit iki resistance kuwat lan kompatibilitas, lan bisa langsung test reaksi nggunakake sistem Foregene Lysis minangka cithakan.Kit iki bisa ditrapake kanggo kit deteksi asam nukleat COVID-19 lan pangembangan kit deteksi asam nukleat bakteri patogen liyane.
Katrangan
Kit RT-qPCR langsung nyedhiyakake buffer RT-qPCR sing dikemas kapisah, Polimerase DNA Foreasy HS Taq sing efisien dhuwurlan Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),nggawe trep kanggo nggawe back-end kit lan imbuhan sistem, ing verifikasi prasaja.
Direct RT-qPCR Kit, nggunakake Foreasy Reverse Transcriptase lan Foreasy HS Taq DNA Polymerase ngembangaken dening Foregene, karo reaksi buffer unik, ndadekake kit iki resistance kuwat lan kompatibilitas, lan bisa langsung test reaksi nggunakake sistem Foregene Lysis minangka cithakan.Kit iki bisa ditrapake kanggo kit deteksi asam nukleat COVID-19 lan pangembangan kit deteksi asam nukleat bakteri patogen liyane.
Kit iki bisa langsung dadi komponèn saka produk IVD, nggunakake gampang lan cepet.Iku mung perlu verifikasi gampang, tanpa ngembangaken maneh.
Spesifikasi
500T, 50.000T
Komponen kit
| Isi kit (20 μL sistem reaksi) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foreasy Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL× 1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 100 μL× 1 | 1 ml× 10 |
| 2× Langsung RT-qPCRpanyangga | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| instruksi | 1 | 1 |
Langkah-langkah Operasi
A: Siapke template lan reagen
1. Siapke cithakan RNA disiapake (Disaranake nggunakake Foregene Total RNA Isolation Kit seri kit kanggo extract lan ngresiki cithakan RNA) utawa sampel produk cracking (Disaranake nggunakake sistem Foregene Lysis), primers tartamtu (10 μM) lan consumables cocog liyane, instrument.
2. Lebokake 2 × Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O lan 20 × ROX Reference Dye (yen perlu) ing kothak karo es, nggawe iki nyawiji alamiah, lan dicampur alon-alon.
B: Siapke sistem RT-qPCR
Njaluk setengah volume buffer reaksi sistem reaksi (contone, yen volume sistem 20 μL, perlu kanggo njaluk 10 μL 2 × Direct RT-qPCR Buffer). Kanggojumlah enzim sing cocog, kita suggest singM-MLV: 10-30 U/20 μL sistem reaksi,TaqDNA polimerase:Sistem reaksi 1-2 U/20 μLiki saran kita, sampeyan kudu nyoba lan nyetel), tambahake cithakan RNA, primer lan probe spesifik, lan tambahake ddH Bebas RNase2O nganti 20 μL.Preparasi spesifik sistem reaksi RT-qPCR bisa dirujuk ing tabel 1 ing ngisor iki.
Tabel 1: Persiapan sistem RT-qPCR
| Komponen | Volume | Konsentrasi pungkasan |
| 2× Langsung RT-qPCR Buffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase | 1-2 U | |
| Primer Maju (10 μM) | 0,8 l | 50-900nM |
| Primer Mundur (10 μM) | 0,8 l | 50-900nM |
| Probe (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Cithakan (RNA utawa Lysate) | X μL | |
| 20 × ROX Referensi Pewarna | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Volume Total | 20 μL |
Cathetan: Forward Primer lan Reverse Primer minangka primer spesifik saka gen target.Sistem qPCR bisa diatur miturut model eksperimen lan PCR praktis.Disaranake 400nM kanggo konsentrasi pungkasan paling primer.Setel volume primer lan probe tartamtu miturut konsentrasi sing disiapake lan konsentrasi akhir sing disaranake.
1*: Pilih konsentrasi akhir ROX Reference Dye sing cocog miturut instrumen PCR kuantitatif sing beda.Konsentrasi ROX Reference Dye optimal saka instrumen PCR kuantitatif umum ditampilake ing tabel ing ngisor iki:
| Instrumen PCR kuantitatif | Konsentrasi pungkasan saka ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Langkah Siji,lsp. | 1× (contone, tambah 1μl 20×ROX Reference Dye ing sistem reaksi 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Cepet, Stratagene Mx3000P, Mx3005P lan Mx4000, etc. | 0,5× (contone, tambah 0,5μl 20×ROX Reference Dye ing sistem reaksi 20 μL) |
| Instrumen PCR Roche, instrumen PCR Bio-Rad, instrumen PCR kuantitatif Eppendorf, lsp. | Tanpa ROX Reference Dye |
Panyimpenan lan urip beting
Kit kudu disimpen ing -20 ± 5 ℃.Sampeyan kudu langsung disimpen ing kulkas termostatik -20 ℃.Periode validitas 2 taun yen disimpen ing kahanan sing cocog.
