• facebook
  • linkedin
  • youtube
spanduk

Panjelasan istilah biologi molekuler dhasar

Kit Biologi Molekuler

1. cDNA lan cccDNA: cDNA minangka DNA untai ganda sing disintesis dening transkripase mbalikke saka mRNA;cccDNA minangka DNA sirkular tertutup untaian ganda plasmid sing bebas saka kromosom.
2. Unit lempitan standar: unit struktur sekunder protein α-helix lan β-sheet bisa mbentuk blok struktural kanthi susunan geometris khusus liwat macem-macem polipeptida sing nyambungake.Lempitan jinis iki biasane disebut struktur super sekunder.Meh kabeh struktur tersier bisa diterangake dening jinis lempitan iki, lan malah jinis gabungan, supaya padha uga disebut unit lempitan standar.
3. CAP: siklik adenosin monofosfat (cAMP) protein reseptor CRP (cAMP reseptor protein), Komplek kawangun sawise kombinasi cAMP lan CRP diarani activating protein CAP (cAMP activated protein).
4. Urutan Palindromic: Urutan pelengkap mbalikke saka bagean saka fragmen DNA, asring situs enzim watesan.
5. micRNA: RNA interfering komplementer utawa RNA antisense, sing nglengkapi urutan mRNA lan bisa nyandhet terjemahan mRNA.
6. Ribozim: RNA kanthi aktivitas katalitik, sing nduweni peran autokatalitik ing proses splicing RNA.
7. Motif: Ana sawetara wilayah lokal kanthi wangun telung dimensi lan topologi sing padha ing struktur spasial molekul protein.
8. Peptida sinyal: peptida kanthi residu asam amino 15-36 ing N-terminus sajrone sintesis protein, sing nuntun transmembrane protein.
9. Attenuator: Urutan nukleotida antarane wilayah operator lan gen struktural sing mungkasi transkripsi.
10. Titik Ajaib: Nalika bakteri tuwuh lan nemoni kekurangan asam amino, bakteri bakal ngasilake respon darurat kanggo mungkasi ekspresi kabeh gen.Sinyal sing ngasilake respon darurat iki yaiku guanosine tetraphosphate (ppGpp) lan guanosine pentaphosphate (pppGpp).Peran PpGpp lan pppGpp ora mung siji utawa sawetara operon, nanging mengaruhi nomer akeh, mula diarani super-regulator utawa titik sihir.
11. Unsur promotor hulu: nuduhake urutan DNA sing nduweni peran regulasi ing aktivitas promotor, kayata TATA ing wilayah -10, TGACA ing wilayah -35, penambah, lan attenuator.
12. Probe DNA: segmen DNA kanthi label kanthi urutan sing dikenal, sing akeh digunakake kanggo ndeteksi urutan sing ora dingerteni lan gen target layar.
13. urutan SD: Iku urutan naleni ribosom lan mRNA, kang ngatur terjemahan.
14. Antibodi Monoklonal: Antibodi sing tumindak mung marang penentu antigen tunggal.
15. Cosmid: Iki minangka vektor DNA eksogen sing digawé sacara artifisial sing nahan wilayah COS ing loro ujung phage lan disambungake menyang plasmid.
16. Skrining titik biru-putih: Gen LacZ (encoding β-galactosidase), enzim bisa ngurai substrat kromogenik X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) kanggo ngasilake biru, saéngga nggawe galur biru.Nalika DNA eksogen dilebokake, gen LacZ ora bisa diungkapake, lan galur kasebut putih, supaya bisa nampilake bakteri rekombinan.Iki diarani screening biru-putih.
17. Unsur cis-acting: Urutan basa tartamtu ing DNA sing ngatur ekspresi gen.
18. Enzim Klenow: Gedhe pecahan DNA polimerase I, kajaba aktivitas eksonuklease 5'3' dibuwang saka holoenzim DNA polimerase I.
19. Anchored PCR: digunakake kanggo nggedhekake DNA saka kapentingan karo urutan dikenal ing siji mburi.Buntut poli-dG ditambahake ing salah siji mburi urutan sing ora dingerteni, banjur poli-dC lan urutan sing dikenal digunakake minangka primer kanggo amplifikasi PCR.
20. Protein fusi: Gen protein eukariotik disambungake karo gen eksogen, lan protein sing kasusun saka terjemahan protein gen asli lan protein eksogen ditulis bebarengan.

Istilah biologi molekuler liyane

1. Peta fisik DNA yaiku urutan ing (restriction endonuclease-digested) fragmen molekul DNA disusun.
2. Pecahan RNase dipérang dadi rong jinis (autocatalysis) lan (heterocatalysis).
3. Ana telung faktor inisiasi ing prokariot yaiku (IF-1), (IF-2) lan (IF-3).
4. Protein transmembrane mbutuhake panuntun dhumateng (peptida sinyal), lan peran chaperones protein yaiku (mbantu kanggo melu rantai peptida menyang konformasi asli protein).
5. Unsur ing promotor umume bisa dipérang dadi rong jinis: (unsur promotor inti) lan (unsur promotor hulu).
6. Isi riset biologi molekuler utamane kalebu telung bagean: (biologi molekuler struktural), (ekspresi lan regulasi gen), lan (teknologi rekombinasi DNA).
7. Rong eksperimen kunci sing nuduhake yen DNA minangka materi genetik yaiku (infeksi pneumococcus tikus) lan (infeksi phage T2 Escherichia coli).potensial).
8. Ana rong prabédan utama antarane hnRNA lan mRNA: (hnRNA wis spliced ​​ing proses Ngonversi menyang mRNA), (5' mburi mRNA ditambahake karo tutup m7pGppp, lan ana polyadenylation ekstra ing 3' mburi asam mRNA (polyA) buntut).
9. Kaluwihan saka wangun multi-subunit protein yaiku (subunit minangka cara ekonomi kanggo pemanfaatan DNA), (bisa nyuda impact kesalahan acak ing sintesis protein ing aktivitas protein), (aktivitas bisa banget efisien lan cepet dibukak lan ditutup).
10. Isi utama mekanisme lempitan protein teori nukleasi pisanan kalebu (nukleasi), (pengayaan struktural), (penataan ulang pungkasan).
11. Galaktosa duweni efek ganda ing bakteri;ing tangan siji (bisa digunakake minangka sumber karbon kanggo pertumbuhan sel);ing sisih liya (uga minangka komponèn saka tembok sel).Mulane, promotor cAMP-CRP-independen S2 dibutuhake kanggo sintesis permanen ing tingkat latar mburi;ing wektu sing padha, promotor gumantung cAMP-CRP S1 dibutuhake kanggo ngatur sintesis tingkat dhuwur.Transkripsi diwiwiti saka (S2) karo G lan saka (S1) tanpa G.
12. Teknologi DNA rekombinan uga dikenal minangka (kloning gen) utawa (kloning molekuler).Tujuan utama yaiku (transfer informasi genetik DNA ing siji organisme menyang organisme liyane).Eksperimen rekombinasi DNA sing khas biasane kalebu langkah-langkah ing ngisor iki: (1) Ekstrak gen target (utawa gen eksogen) saka organisme donor, lan nyambungake kanthi enzim menyang molekul DNA liyane (vektor kloning) kanggo mbentuk molekul DNA rekombinan anyar.② Molekul DNA rekombinan ditransfer menyang sel panampa lan direplikasi ing sel panampa.Proses iki diarani transformasi.③ Layar lan ngenali sel panampa sing wis nyerep DNA rekombinan.④Cultivate sel sing ngemot DNA rekombinan ing jumlah gedhe kanggo ndeteksi apa gen bantuan asing ditulis.
13. Ana rong jinis replikasi plasmid: sing dikontrol kanthi ketat dening sintesis protein sel inang diarani (plasmid kenceng), lan sing ora dikontrol kanthi ketat dening sintesis protein sel inang diarani (plasmid santai).
14. Sistem reaksi PCR kudu nduweni syarat ing ngisor iki: a.Primer DNA (kira-kira 20 basa) kanthi urutan komplementer ing saben pungkasan rong untaian gen target sing bakal dipisahake.b.Enzim kanthi stabilitas termal kayata: TagDNA polimerase.c, dNTPd, urutan DNA saka kapentingan minangka cithakan
15. Proses reaksi dhasar PCR kalebu telung tahap: (denaturasi), (anil), lan (ekstensi).
16. Proses dhasar kewan transgenik biasane kalebu: ①Introduksi gen asing kloning menyang inti saka endhog sing dibuahi utawa sel induk embrio;②Transplantasi endhog sing wis dibuahi utawa sel induk embrio menyang uterus wadon;③Pembangunan lan pertumbuhan embrio sing lengkap Kanggo turunane kanthi gen asing;④ Gunakake kéwan iki sing bisa gawé protèin manca minangka stok breeding kanggo ngasilake garis homozigot anyar.
17. Garis sel hibridoma diasilake kanthi hibridisasi (limpa B) sel karo sel (mieloma), lan amarga (sel limpa) bisa nggunakke hypoxanthine lan (sel balung) nyedhiyakake fungsi pembelahan sel, mula bisa ditanam ing medium HAT.tuwuh.
18. Kanthi pendalaman riset, antibodi generasi pisanan diarani (antibodi poliklonal), generasi kapindho (antibodi monoklonal), lan generasi katelu (antibodi rekayasa genetika).
19. Saiki, rekayasa genetika virus serangga utamané fokus ing baculovirus, sing diwujudake ing introduksi (gen toksin eksogen);(gen sing ngganggu siklus urip normal serangga);(modifikasi gen virus).
20. Faktor protein trans-acting sing cocog karo unsur umum TATA, GC, lan CAAT ing promotor RNA polimerase II mamalia yaiku (TFIID), (SP-1) lan (CTF / NF1).
rong puluh siji.Faktor transkripsi dhasar saka RNA polimerase Ⅱ yaiku, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, lan urutan pengikatane yaiku: (D, A, B, E).Ing endi fungsi TFII-D (ngiket menyang kothak TATA).
rong puluh loro.Akèh-akèhé faktor transkripsi sing ngiket DNA dianggo ing wangun dimer.Domain fungsional faktor transkripsi sing ngiket DNA biasane ing ngisor iki (helix-turn-helix), (motif driji seng), (basic-leucine) motif zipper).
telulikur.Ana telung jinis mode pembelahan endonuclease watesan: (potong ing sisih 5' sumbu simetri kanggo ngasilake ujung lengket 5'), (potong ing sisih 3' sumbu simetri kanggo ngasilake ujung lengket 3' (potong ing sumbu simetri kanggo ngasilake segmen sing rata) ).
patlikur.DNA plasmid duwe telung konfigurasi sing beda: (konfigurasi SC), (konfigurasi oc), (konfigurasi L).Pisanan ing elektroforesis yaiku (konfigurasi SC).
25. Sistem ekspresi gen eksogen, utamane (Escherichia coli), (Ragi), (Serangga) lan (Tabel sel mamalia).
26. Cara sing umum digunakake kanggo kewan transgenik yaiku: (metode infeksi retroviral), (metode microinjection DNA), (metode sel induk embrio).

Aplikasi Biologi Molekuler

1. Sebutna fungsi luwih saka 5 RNA?
Transfer RNA tRNA Transfer asam amino Ribosom RNA rRNA Ribosom dadi messenger RNA mRNA Cithakan sintesis protein Heterogen nuklear RNA hnRNA Prekursor mRNA diwasa RNA nuklir cilik snRNA Terlibat ing splicing hnRNA Sitoplasma cilik RNA scRNA/7SL-RNA protein sitoplasma cilik RNA scRNA/7SL-RNA protein Sinyal rekulum-RNA sinyal plasma lan sintesis RNA-RNA plasma RNA Ngatur ekspresi gen Ribozyme RNA RNA aktif kanthi enzim
2. Apa bedane utama antarane promotor prokariotik lan eukariotik?
Prokariotik TTGACA --- TATAAT------Situs Inisiasi-35 -10 Enhancer Eukariotik---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Situs Inisiasi-110 -70 -25
3. Apa aspek utama konstruksi buatan plasmid alam?
Plasmid alami asring duwe cacat, mula ora cocog digunakake minangka operator kanggo rekayasa genetika, lan kudu diowahi lan dibangun: a.Tambah gen penanda pilihan sing cocok, kayata loro utawa luwih, sing gampang digunakake kanggo seleksi, biasane gen antibiotik.b.Tambah utawa nyuda situs pemotongan enzim sing cocog kanggo nggampangake rekombinasi.c.Shorten dawa, Cut mati pecahan rasah, nambah efficiency ngimpor lan nambah kapasitas loading.d.Ganti replika, saka kenceng dadi longgar, saka salinan luwih sithik dadi luwih akeh.e.Tambah unsur genetik khusus miturut syarat khusus rekayasa genetika
4. Menehi conto cara kanggo screening diferensial cDNA tissue-tartamtu?
Rong populasi sel wis disiapake, gen target diekspresikake utawa diekspresiake kanthi dhuwur ing salah sawijining sel, lan gen target ora diekspresiake utawa diekspresikake ing sel liyane, banjur gen target ditemokake kanthi hibridisasi lan perbandingan.Contone, sajrone kedadeyan lan pangembangan tumor, sel tumor bakal nampilake mRNA kanthi tingkat ekspresi sing beda tinimbang sel normal.Mulane, gen sing gegandhengan karo tumor bisa disaring kanthi hibridisasi diferensial.Cara induksi uga bisa digunakake kanggo nampilake gen sing ekspresine diinduksi.
5. Generasi lan skrining garis sel hibridoma?
Sel B limpa + sel myeloma, nambah polyethylene glycol (PEG) kanggo ningkataké fusi sel, lan sel fusi B-myeloma splenic thukul ing medium HAT (ngemot hypoxanthine, aminopterin, T) terus kanggo nggedhekake nutrisi.Fusi sel ngandhut: sel fusi limpa-limpa: ora bisa tuwuh, sel limpa ora bisa dikultur in vitro.Sel fusi balung-balung: ora bisa nggunakke hypoxanthine, nanging bisa nyintesis purin liwat jalur kapindho nggunakake reduktase folat.Aminopterin nyegah reduktase folat lan mulane ora bisa tuwuh.Sel fusi balung-limpa: bisa tuwuh ing HAT, sel limpa bisa nggunakke hypoxanthine, lan sel balung nyedhiyakake fungsi pembelahan sel.
6. Apa prinsip lan cara kanggo nemtokake struktur utami DNA kanthi metode terminasi terminal dideoxy (metode Sanger)?
Prinsip kasebut yaiku nggunakake terminator rantai nukleotida-2,,3,-dideoxynucleotide kanggo mungkasi ekstensi DNA.Amarga ora duwe 3-OH sing dibutuhake kanggo pambentukan ikatan 3/5/phosphodiester, yen wis digabung menyang rantai DNA, rantai DNA ora bisa ditambah maneh.Miturut prinsip pasangan basa, saben polimerase DNA perlu dNMP kanggo melu ing chain DNA biasane lengkap, ana rong kemungkinan, siji kanggo melu ing ddNTP, kang asil ing mandap extension chain deoxynucleotide;liyane iku kanggo melu ing dNTP, supaya chain DNA isih bisa terus kanggo ngluwihi nganti ddNTP sabanjuré digabung.Miturut cara iki, klompok fragmen DNA saka dawa beda pungkasan ing ddNTP bisa dijupuk.Cara kasebut dipérang dadi patang klompok masing-masing ddAMP, ddGMP, ddCMP, lan ddTMP.Sawise reaksi kasebut, elektroforesis gel polyacrylamide bisa maca urutan DNA miturut pita renang.
7. Apa efek regulasi positif saka protein aktivator (CAP) ing transkripsi?
Siklik adenylate (cAMP) protein reseptor CRP (cAMP reseptor protein), Komplek sing dibentuk saka kombinasi cAMP lan CRP diarani CAP (cAMPactivated protein).Nalika E. coli ditanam ing medium kurang glukosa, sintesis CAP mundhak, lan CAP nduweni fungsi ngaktifake promotor kayata laktosa (Lac).Sawetara promotor sing gumantung karo CRP ora duwe fitur urutan wilayah -35 (TTGACA) sing umum sing diduweni promotor.Mulane, RNA polimerase angel diikat.Ing ngarsane CAP (fungsi): Ngartekno bisa nambah pancet naleni enzim lan promotor.Utamane nuduhake rong aspèk ing ngisor iki: ① CAP mbantu molekul enzim kanggo orientasi kanthi bener kanthi ngganti konformasi promotor lan interaksi karo enzim, supaya bisa gabung karo wilayah -10 lan muter peran ngganti fungsi wilayah -35.②CAP uga bisa nyandhet ikatan RNA polimerase menyang situs liyane ing DNA, saéngga nambah kemungkinan naleni promotor tartamtu.
8. Langkah-langkah apa sing biasane kalebu ing eksperimen rekombinasi DNA sing khas?
a.Ekstrak gen target (utawa gen eksogen) saka organisme donor, lan sambungake kanthi enzim menyang molekul DNA liyane (vektor kloning) kanggo mbentuk molekul DNA rekombinan anyar.b.Nransfer molekul DNA rekombinan menyang sel panampa lan niru lan nyimpen ing sel panampa.Proses iki diarani transformasi.c.Layar lan ngenali sel panampa sing wis nyerep DNA rekombinan.d.Kultur massa sel sing ngemot DNA rekombinan kanggo ndeteksi apa gen bantuan asing kasebut dituduhake.
9. Konstruksi perpustakaan gen Telung cara kanggo screening rekombinan diwenehi lan proses kasebut diterangake kanthi ringkes.
Skrining resistensi antibiotik, inaktivasi resistensi insersi, skrining bintik biru-putih utawa PCR, skrining diferensial, probe DNA Umume vektor kloning nggawa gen resistensi antibiotik (anti-ampicillin, tetracycline).Nalika plasmid ditransfer menyang Escherichia coli, bakteri bakal entuk resistensi, lan sing tanpa transfer ora duwe resistensi.Nanging ora bisa mbedakake apa wis diatur maneh utawa ora.Ing vektor sing ngemot rong gen resistensi, yen fragmen DNA asing dilebokake ing salah sawijining gen lan nyebabake gen kasebut ora aktif, rong kontrol piring sing ngemot obat sing beda bisa digunakake kanggo nampilake rekombinan positif.Contone, plasmid pUC ngandhut gen LacZ (encoding β-galactosidase), sing bisa ngurai substrat kromogenik X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) kanggo ngasilake biru, saéngga ngowahi galur dadi biru.Nalika DNA manca dilebokake, gen LacZ ora bisa ditulis, lan galur kasebut putih, supaya bisa nampilake bakteri rekombinan.
10. Nerangake proses dhasar kanggo entuk kewan transgenik liwat sel induk embrio?
Sèl induk embrionik (ES) ya iku sèl embrio nalika perkembangan embrio, sing bisa dibudidayakan lan diproliferasi sacara artifisial lan duwé fungsi mbédakaké dadi jinis sèl liya.Kultur sel ES: Massa sel njero blastokista diisolasi lan dikultur.Nalika ES dibudidayakake ing lapisan tanpa feeder, bakal dibedakake dadi macem-macem sel fungsional kayata sel otot lan sel N.Nalika dibudidaya ing medium sing ngemot fibroblast, ES bakal njaga fungsi diferensiasi.ES bisa dimanipulasi sacara genetis, lan fungsi diferensiasi bisa diintegrasi tanpa mengaruhi fungsi diferensiasi, sing ngrampungake masalah integrasi acak.Ngenalake gen eksogen menyang sel induk embrio, banjur implan menyang uterus tikus wadon sing ngandhut, berkembang dadi pups, lan nyabrang kanggo entuk tikus homozigot.