Kit qPCR RT Langsung Sel—SYBR GREEN I Kit Lisis Sel Langsung Siap Sel Satu langkah qRT-PCR Kit
Katrangan
Kit iki nggunakake sistem buffer lisis unik sing bisa cepet ngeculake RNA saka sampel sel kultur kanggo reaksi RT-qPCR, saéngga ngilangi proses pemurnian RNA sing akeh wektu lan angel.Cithakan RNA bisa dipikolehi mung 7 menit.5×Campuran RT Langsung lan 2×Reagen qPCR Mix-SYBR langsung sing diwenehake dening kit bisa kanthi cepet lan efektif entuk asil PCR kuantitatif wektu nyata.
5×Campuran RT Langsung lan 2×Direct qPCR Mix-SYBR duwe toleransi inhibitor kuwat, lan lysate saka conto bisa digunakake minangka cithakan kanggo RT-qPCR langsung.Kit iki ngemot RNA high-affinity reverse transcriptase Foregene, lan Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, reaksi buffer, PCR optimizer lan stabilizer.
Spesifikasi
200×20μl Rxns, 1000×20μl rxn
Komponen kit
| Bagean I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Bagean II | Penghapus DNA |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Langsung qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × ROX Referensi Pewarna | |
| Bebas RNase ddH2O | |
| instruksi | |
Fitur & kaluwihan
■Prasaja lan efektif : kanthi teknologi Cell Direct RT, conto RNA bisa dipikolehi mung 7 menit.
■ Panjaluk sampel cilik, nganti 10 sel bisa diuji.
■ throughput dhuwur: bisa cepet ndeteksi RNA ing sel kultur ing 384, 96, 24, 12, 6-sumur piring.
■ DNA Eraser bisa cepet mbusak génom dirilis, nemen nyuda impact ing asil eksperimen sakteruse.
■ Optimized RT lan sistem qPCR ndadekake loro-langkah RT-PCR mbalikke transkripsi luwih efisien lan PCR luwih spesifik, lan luwih tahan kanggo RT-qPCR inhibitor reaksi.
Aplikasi kit
Lingkup aplikasi: sel kultur.
- RNA dirilis dening lysis sampel: mung ditrapake kanggo cithakan RT-qPCR kit iki.
- Kit bisa digunakake kanggo tujuan ing ngisor iki: analisis ekspresi gen, verifikasi efek silencing gen sing dimediasi siRNA, screening obat, lsp.
Diagram
Panyimpenan lan urip beting
Part I saka kit iki kudu disimpen ing 4 ℃;Part II kudu disimpen ing -20 ℃.
Foregene Protease Plus II kudu disimpen ing 4℃, ora beku ing -20 ℃.
Reagen 2×Langsung qPCR Mix-SYBR kudu disimpen ing -20℃ing pepeteng;yen kerep digunakake, uga bisa disimpen ing 4℃ kanggo panyimpenan jangka pendek (nggunakake sajrone 10 dina).
Prinsip desain primer PCR Real Time
Maju Primer lan Reverse Primer
Kanggo Real Time PCR, desain primer penting banget.Primer ana hubungane karo spesifik lan efisiensi amplifikasi PCR, lan bisa dirancang kanthi referensi kanggo prinsip ing ngisor iki:
Dawane primer: 18-30bp.
Isi GC: 40-60%.
Nilai Tm: Piranti lunak desain Primer, kayata Primer 5, bisa menehi nilai Tm saka primer.Nilai Tm saka primer hulu lan hilir kudu cedhak.Rumus pitungan Tm uga bisa digunakake: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nalika nindakake PCR, suhu ing ngisor nilai Tm primer 5 °C umume dipilih minangka suhu anil (kenaikan suhu anil sing cocog bisa nambah kekhususan reaksi PCR).
Primer lan produk PCR:
Desain primer amplifikasi PCR dawa produk luwih apik 100-150bp.
Primer desain ing area struktur sekunder saka cithakan kudu nyingkiri sabisa.
Aja mbentuk 2 utawa luwih basa pelengkap ing antarane 3' ujung primer hulu lan hilir.
Dasar terminal primer 3′ ora bisa ana karo 3 G utawa C berturut-turut tambahan.
Primer dhewe ora bisa duwe struktur pelengkap, yen ora, struktur jepit rambut bakal dibentuk, nyebabake amplifikasi PCR.
ATCG kudu disebarake kanthi merata ing urutan primer, lan basis terminal 3′ kudu dihindari minangka T.
Lampiran 1:Paket tambahan komponen Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Solusi Lisis Sel
|
| |||
| Komponen kit (sistem lisis 24 sumur / sumur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Partaku | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 l | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartII | Penghapus DNA | 400 l | 1 ml × 2 |
2. RT Campuran
|
| |
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 l |
| ddH Bebas RNase2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Langsung qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × ROX Referensi Pewarna | 40 l | 200 μl |
| ddH Bebas RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksi Manual:
