Kit qPCR RT Langsung Sel—Siap Sel Lisis Sel Langsung Taqman Probe Kit qRT-PCR Siji-Langkah
Katrangan
Produk iki nggunakake sistem buffer lysis unik kanggo cepet nerbitaké RNA saka sampel sel kultur kanggo reaksi RT-qPCR, ngilangke proses pemurnian RNA wektu-akeh lan laborious, lan mung 7 menit kanggo diwenehi cithakan RNA dibutuhake, karo 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman kasedhiya dening kit bisa cepet lan efisien asil PCR wektu nyata.
5 × Direct RT Mix lan 2 × Direct qPCR Mix-Taqman duwe toleransi inhibitor kuwat lan bisa nindakake kuwalikan efisien lan amplifikasi tartamtu nggunakake lysate saka sampel kanggo diukur minangka cithakan.Reagen ngandhut Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaksi Buffer, PCR Optimizer lan Stabilizer, kang bisa digunakake karo lysis buffer kanggo cepet lan gampang ndeteksi conto, lan nduweni karakteristik sensitivitas dhuwur, specificity lan stabilitas.
Spesifikasi
200×20μl Rxns, 1000×20μl rxn
Komponen kit
| QuickEasyTMSel Langsung RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Komponen kit Sistem Reaksi qPCR 20μl | DRT-01021 | DRT-01022 | Cathetan | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Part I | Buffer CL | 4 ml | 20 ml | Lisis sel |
| Foregene Protease Plus II | 80 l | 400 l | ||
| Buffer ST | 400 l | 1 ml × 2 | ||
|
Part II | Penghapus DNA | 80 l | 400 l | |
| 5×Langsung RT Campuran * | 160 l | 800 l | RT | |
| 2× Langsung qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20 × ROX Referensi Pewarna | 40 l | 200 μl | ||
| ddH Bebas RNase2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Instruksi Manual | 1 bêsik | 1 bêsik | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman bisa dituku kanthi kapisah
Fitur & kaluwihan
■Prasaja lan efektif : kanthi teknologi Cell Direct RT, conto RNA bisa dipikolehi mung 7 menit.
■ Panjaluk sampel cilik, nganti 10 sel bisa diuji.
■ throughput dhuwur: bisa cepet ndeteksi RNA ing sel kultur ing 384, 96, 24, 12, 6-sumur piring.
■ DNA Eraser bisa cepet mbusak génom dirilis, nemen nyuda impact ing asil eksperimen sakteruse.
■ Optimized RT lan sistem qPCR ndadekake loro-langkah RT-PCR mbalikke transkripsi luwih efisien lan PCR luwih spesifik, lan luwih tahan kanggo RT-qPCR inhibitor reaksi.
Aplikasi kit
Lingkup aplikasi: sel kultur.
- RNA dirilis dening lysis sampel: mung ditrapake kanggo cithakan RT-qPCR kit iki.
- Kit bisa digunakake kanggo tujuan ing ngisor iki: analisis ekspresi gen, verifikasi efek silencing gen sing dimediasi siRNA, screening obat, lsp.
Panyimpenan lan urip beting
Bagean I kit iki kudu disimpen ing 4℃;Part II kudu disimpen ing -20 ℃.
Foregene Protease Plus II kudu disimpen ing 4℃, ora beku ing -20 ℃.
Reagen 2×Langsung qPCR Mix-Taqman kudu disimpen ing -20℃ing pepeteng;yen kerep digunakake, uga bisa disimpen ing 4℃ kanggo panyimpenan jangka pendek (nggunakake sajrone 10 dina).
Prinsip desain primer PCR Real Time
Maju Primer lan Reverse Primer
Kanggo Real Time PCR, desain primer penting banget.Primer ana hubungane karo spesifik lan efisiensi amplifikasi PCR, lan bisa dirancang kanthi referensi kanggo prinsip ing ngisor iki:
- Dawane primer: 18-30bp.
- Isi GC: 40-60%.
- Nilai Tm: Piranti lunak desain Primer, kayata Primer 5, bisa menehi nilai Tm saka primer.Nilai Tm saka primer hulu lan hilir kudu cedhak.Rumus pitungan Tm uga bisa digunakake: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nalika nindakake PCR, suhu ing ngisor nilai Tm primer 5 °C umume dipilih minangka suhu anil (kenaikan suhu anil sing cocog bisa nambah kekhususan reaksi PCR).
- Primer lan produk PCR:
- Desain primer amplifikasi PCR dawa produk luwih apik 100-150bp.
- Primer desain ing area struktur sekunder saka cithakan kudu nyingkiri sabisa.
- Aja mbentuk 2 utawa luwih basa pelengkap ing antarane 3' ujung primer hulu lan hilir.
- Dasar terminal primer 3′ ora bisa ana karo 3 G utawa C berturut-turut tambahan.
- Primer dhewe ora bisa duwe struktur pelengkap, yen ora, struktur jepit rambut bakal dibentuk, nyebabake amplifikasi PCR.
- ATCG kudu disebarake kanthi merata ing urutan primer, lan basis terminal 3′ kudu dihindari minangka T.
Lampiran1: Clangsung waeRT-qPCR Kit komponent paket tambahan
1. Solusi Lisis Sel
| Solusi Lisis Sel | |||
| Komponen kit (sistem lisis 24 sumur / sumur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Partaku | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 l | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartII | Penghapus DNA | 400 l | 1 ml × 2 |
| RT Campuran | |
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 l |
| ddH Bebas RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Campuran | ||
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Langsung qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX Referensi Pewarna | 40 l | 200 μl |
| ddH Bebas RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksi Manual:
