(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit - SYBR Green I
Katrangan
Ing(96-uga) QuickEasyTM Kit RT-qPCR Sel Langsung–SYBR Green Inyedhiyakakesistem buffer lysis unikto cepet ngeculake RNAsaka sel kulturconto kanggo reaksi RT-qPCR, mbusak wektu-akeh lan laboriousProses pemurnian RNA, lan mung butuh 7 menit kanggo entuk cithakan RNA sing dibutuhake.Ing5× Direct RT Mixlan2× Langsung qPCR Mix-SYBRkasedhiya ing kothak bisa cepet lankanthi efektif entuk kuantitatif wektu nyataHasil PCR.
5 × Direct RT Mix lan 2 × Direct qPCR Mix-SYBR duwe toleransi inhibitor kuwat, lan bisa nggunakake lysate saka sampel kanggo dites minangka cithakan kanggo transkripsi mbalikke efisien lan amplifikasi tartamtu.Reagen ngandhut Foregene unik Reverse Transcriptase kanthi afinitas dhuwur kanggo RNA, uga Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , buffer reaksi, PCR optimizer lan stabilizer, lan bisa digunakake bebarengan karo buffer lysis kanggo ndeteksi sampel kanthi cepet, gampang lan akurat, lan nduweni karakteristik sensitivitas dhuwur, specificity kuwat lan stabilitas apik.
Kit iki ngarahke ing lysis mikro-sistem saka 96-uga budoyo sel, lan wis uniformity apik lan konsistensi;komponen kit nyedhiyani 96 reaksi lisis, 96 reaksi transkripsi mbalikke lan 96 × 2 reaksi qPCR, kang bisa ketemu piring sel 96-sumur kanggo nggunakake siji-wektu, Nyingkiri polusi disebabake mbukak bola-bali, pembekuan lan thawing reagen lan degradasi kinerja reagen.
Komponen kit
| Komposisi kit ( 50 μSistem lisis L/20 μLRT sistem reaksi / 20μSistem reaksi qPCR L) | DRT-03011 | Tetembungane | |
| 96T | |||
| PartI | panyanggaCL | 5 ml | selLisis |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| panyanggaST | 500 μL | ||
| Part II | DNAPambupus | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Campuran qPCR Langsung-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX Referensi Pewarna | 400µL | ||
| RNase- GratisddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mtaunan | 1 potongan | 1 porsi | |
*: Ing lysis reagen DNA Eraser kalebu ing Part II saka kit;Komponen Cell Lysis, RT, lan qPCR bisa dituku kanthi kapisah.
Fitur & kaluwihan
■Prasaja lan efektif : kanthi teknologi Cell Direct RT, conto RNA bisa dipikolehi mung 7 menit.
■ Panjaluk sampel cilik, nganti 10 sel bisa diuji.
■ throughput dhuwur: bisa cepet ndeteksi RNA ing sel kultur ing 384, 96, 24, 12, 6-sumur piring.
■ DNA Eraser bisa cepet mbusak génom dirilis, nemen nyuda impact ing asil eksperimen sakteruse.
■ Optimized RT lan sistem qPCR ndadekake loro-langkah RT-PCR mbalikke transkripsi luwih efisien lan PCR luwih spesifik, lan luwih tahan kanggo RT-qPCR inhibitor reaksi.
Aplikasi kit
Lingkup aplikasi: sel kultur.
- RNA dirilis dening lysis sampel: mung ditrapake kanggo cithakan RT-qPCR kit iki.
- Kit bisa digunakake kanggo tujuan ing ngisor iki: analisis ekspresi gen, verifikasi efek silencing gen sing dimediasi siRNA, screening obat, lsp.
Panyimpenan lan urip beting
Bagean I kit iki kudu disimpen ing 4℃;Part II kudu disimpen ing -20 ℃.
Foregene Protease Plus II kudu disimpen ing 4℃, ora beku ing -20 ℃.
Reagen 2×Langsung qPCR Mix-Taqman kudu disimpen ing -20℃ing pepeteng;yen kerep digunakake, uga bisa disimpen ing 4℃ kanggo panyimpenan jangka pendek (nggunakake sajrone 10 dina).
Prinsip desain primer PCR Real Time
Maju Primer lan Reverse Primer
Kanggo Real Time PCR, desain primer penting banget.Primer ana hubungane karo spesifik lan efisiensi amplifikasi PCR, lan bisa dirancang kanthi referensi kanggo prinsip ing ngisor iki:
- Dawane primer: 18-30bp.
- Isi GC: 40-60%.
- Nilai Tm: Piranti lunak desain Primer, kayata Primer 5, bisa menehi nilai Tm saka primer.Nilai Tm saka primer hulu lan hilir kudu cedhak.Rumus pitungan Tm uga bisa digunakake: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nalika nindakake PCR, suhu ing ngisor nilai Tm primer 5 °C umume dipilih minangka suhu anil (kenaikan suhu anil sing cocog bisa nambah kekhususan reaksi PCR).
- Primer lan produk PCR:
- Desain primer amplifikasi PCR dawa produk luwih apik 100-150bp.
- Primer desain ing area struktur sekunder saka cithakan kudu nyingkiri sabisa.
- Aja mbentuk 2 utawa luwih basa pelengkap ing antarane 3' ujung primer hulu lan hilir.
- Dasar terminal primer 3′ ora bisa ana karo 3 G utawa C berturut-turut tambahan.
- Primer dhewe ora bisa duwe struktur pelengkap, yen ora, struktur jepit rambut bakal dibentuk, nyebabake amplifikasi PCR.
- ATCG kudu disebarake kanthi merata ing urutan primer, lan basis terminal 3′ kudu dihindari minangka T.
Lampiran1: Clangsung waeRT-qPCR Kit komponent paket tambahan
1. Solusi Lisis Sel
| Solusi Lisis Sel | |||
| Komponen kit (sistem lisis 24 sumur / sumur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Partaku | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 l | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartII | Penghapus DNA | 400 l | 1 ml × 2 |
| RT Campuran | |
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 l |
| ddH Bebas RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Campuran | ||
| Komponen kit (sistem reaksi 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Langsung qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX Referensi Pewarna | 40 l | 200 μl |
| ddH Bebas RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Instruksi Manual:
