Foreasy HS Taq DNA Polimerase
Deskripsi Kit:
◮Spesifisitas dhuwur: Enzim kanthi aktivitas wiwitan panas sing dhuwur.
◮Amplifikasi Cepet: 10 sec/kb.
◮Daya adaptasi cithakan dhuwur: bisa digunakake kanggo nggedhekake Dhuwur kanthi efisienGCnilailanmacem-macem cithakan DNA sing angel digedhekake.
◮Kasetyan sing kuat: Kasetyan kasebut kaping 6of biasa Taq Enzim.
Katrangan
Foreasy HS Taq DNA Polymerase minangka enzim Taq anyar sing ditulis ing bakteri rekayasa Escherichia coli kanthi teknologi rekombinasi gen.Sawise enzim diobati kanthi proses khusus, iku'Aktivitas s dicegah sadurunge aktivasi termal, saéngga nyegah amplifikasi non-spesifik sing disebabake dening anil non-spesifik saka primer utawa dimer primer ing kondisi suhu sing kurang.Produk iki cocog kanggo PCR React sing spesifik bangetion, M ultiple x PCR , kandungan GC dhuwur (> 60%),karostruktur sekunderutawa liyanegenom latar mburi kuwaticsamplifikasi lan genom skala gedheicsdeteksi amplifikasi.Enzim kasebut nduweni aktivitas polimerase DNA 5' → 3' lan aktivitas eksonuklease 5' → 3', nanging ora ana aktivitas eksonuklease 3' → 5'.
Komponen kit
| Komponen | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 5000 U (1 mL) | 50 KU (10 mL) | 500 KU (100 mL) |
| 2 × Taq Reaksi Buffer | 25 ml × 5 | 250 ml × 5 | 500 ml × 25 |
Fitur & kaluwihan
- Spesifisitas dhuwur: Enzim kanthi aktivitas wiwitan panas sing dhuwur.
- Amplifikasi Cepet: 10 detik/kb.
- Daya adaptasi cithakan sing dhuwur: bisa digunakake kanggo nggedhekake Dhuwur kanthi efisienGCnilailanmacem-macem cithakan DNA sing angel digedhekake.
- Kasetyan sing kuat: Kasetyan kasebut 6 kapingof biasa Taq Enzim.
Aplikasi kit
- Macem-macem Sistem PCR/qPCR lan sistem PCR langsung
- Fragmen DNA Amplified PCR
- tandha DNA
- Urutan DNA
- PCR plus buntut A
Definisi Kegiatan
1U : Jumlah enzim sing dibutuhake kanggo nggabungake 10 nmol sakaDNAdadi materi sing ora larut asam nggunakake DNA sperma salmon aktif minangka template / primer, 74 °C, 30 menit.
Kondisi Reaksi
| Suhu | Wektu Reaksi | Wektu siklus |
| 37°C | 5 min | 1 |
| 94°C | 5 min | 1 |
| 94°C | 10 sek | 40 |
| 60°C | 10 sek |
Cathetan:Kanggo sistem 10 µL lan 20 µL, tambahake volume minyak mineral sing padha yen siklus termal ora duwe tutup panas.
Kondisi reaksi PCR beda-beda gumantung saka kondisi struktur template, primer, lan liya-liyane.Ing operasi tartamtu, perlu kanggo ngrancang kondisi reaksi sing optimal, kalebu suhu annealing, wektu extension, lan liya-liyane, miturut kondisi tartamtu kayata jinis cithakan, ukuran fragmen target, urutan dasar fragmen sing digedhekake, lan isi GC lan dawa primer.
Lumbung
-20 ± 5 °C kanggo 2 taun utawa ing -80 °C kanggo panyimpenan jangka panjang.
Ora ana sinyal amplifikasi
1.Taq DNA Polymerase ing kit ilang kegiatan amarga panyimpenan sing ora bener utawa kadaluwarsa kit.
Rekomendasi: Konfirmasi kahanan panyimpenan kit;nambah maneh jumlah cocok saka Taq DNA Polymerase kanggo sistem PCR utawa tuku Real Time PCR Kit anyar kanggo nyobi related.
2. Ana akeh inhibitor Taq DNA Polymerase ing cithakan DNA.
Saran: Repurify cithakan utawa nyuda jumlah cithakan sing digunakake.
3. Konsentrasi Mg2+ ora cocok.
Rekomendasi: Konsentrasi Mg2+ saka 2 × Campuran PCR Nyata sing diwenehake yaiku 3.5mM.Nanging, kanggo sawetara primer lan template khusus, konsentrasi Mg2+ bisa uga luwih dhuwur.Mulane, sampeyan bisa langsung nambah MgCl2 kanggo ngoptimalake konsentrasi Mg2+.Dianjurake kanggo nambah Mg2 + 0,5mM saben wektu kanggo Optimization.
4. Kondisi amplifikasi PCR ora cocok, lan urutan sepisanan utawa konsentrasi ora bener.
Saran: konfirmasi kabeneran urutan primer lan primer durung dirusak;yen sinyal amplifikasi ora apik, coba ngurangi suhu annealing lan atur konsentrasi primer kanthi tepat.
5. Jumlah cithakan sithik banget utawa akeh banget.
Rekomendasi: Nindakake pengenceran gradien linearisasi cithakan, lan pilih konsentrasi cithakan kanthi efek PCR paling apik kanggo eksperimen PCR Wektu Nyata.
NTC nduweni nilai fluoresensi sing dhuwur banget
1.Kontaminasi reagen sing disebabake sajrone operasi.
Rekomendasi: Ganti nganggo reagen anyar kanggo eksperimen PCR Wektu Nyata.
2.Kontaminasi dumadi nalika nyiapake sistem reaksi PCR.
Rekomendasi: Njupuk langkah-langkah protèktif sing dibutuhake sajrone operasi, kayata: nganggo sarung tangan lateks, nggunakake tip pipette kanthi saringan, lsp.
3. Primer dirusak, lan degradasi primer bakal nyebabake amplifikasi non-spesifik.
Saran: Gunakake elektroforesis SDS-PAGE kanggo ndeteksi apa primer rusak, lan ngganti karo primer anyar kanggo eksperimen PCR Real Time.
Primer dimer utawa amplifikasi non-spesifik
1.Konsentrasi Mg2+ ora cocok.
Rekomendasi: Konsentrasi Mg2 + saka 2 × Real PCR EasyTM Mix kita nyedhiyani punika 3,5 mM.Nanging, kanggo sawetara primer lan template khusus, konsentrasi Mg2+ bisa uga luwih dhuwur.Mulane, sampeyan bisa langsung nambah MgCl2 kanggo ngoptimalake konsentrasi Mg2+.Dianjurake kanggo nambah Mg2 + 0,5mM saben wektu kanggo Optimization.
2. Suhu annealing PCR kurang banget.
Saran: Tambah suhu anil PCR kanthi 1 ℃ utawa 2 ℃ saben wektu.
3.Produk PCR dawa banget.
Rekomendasi: Dawane produk PCR Wektu Nyata kudu antarane 100-150bp, ora luwih saka 500bp.
4. Primer dirusak, lan degradasi primer bakal nyebabake tampilan amplifikasi tartamtu.
Saran: Gunakake elektroforesis SDS-PAGE kanggo ndeteksi apa primer rusak, lan ngganti karo primer anyar kanggo eksperimen PCR Real Time.
5.Sistem PCR ora bener, utawa sisteme cilik banget.
Saran: Sistem reaksi PCR sing cilik banget bakal nyebabake akurasi deteksi mudhun.Paling apik nggunakake sistem reaksi sing disaranake dening instrumen PCR kuantitatif kanggo mbukak maneh eksperimen PCR Wektu Nyata.
Nilai kuantitatif sing ora bisa diulang
1.Instrumen rusak.
Saran: Bisa uga ana kesalahan ing antarane saben bolongan PCR instrumen, sing nyebabake reproduksibilitas sing kurang sajrone manajemen suhu utawa deteksi.Mangga dipriksa miturut instruksi instrumen sing cocog.
2.Kemurnian sampel ora apik.
Rekomendasi: Sampel sing ora murni bakal nyebabake reproduktifitas eksperimen sing ora apik, sing kalebu kemurnian cithakan lan primer.Iku paling apik kanggo repurify cithakan, lan primers paling diresiki dening SDS-PAGE.
3. Ing preparation sistem PCR lan wektu panyimpenan dawa banget.
Saran: Gunakake sistem PCR Wektu Nyata kanggo eksperimen PCR sanalika sawise nyiapake, lan aja ditinggalake nganti suwe.
4. Kondisi amplifikasi PCR ora cocok, lan urutan sepisanan utawa konsentrasi ora bener.
Saran: konfirmasi kabeneran urutan primer lan primer durung dirusak;yen sinyal amplifikasi ora apik, coba ngurangi suhu annealing lan atur konsentrasi primer kanthi tepat.
5.Sistem PCR ora bener, utawa sisteme cilik banget.
Saran: Sistem reaksi PCR sing cilik banget bakal nyebabake akurasi deteksi mudhun.Paling apik nggunakake sistem reaksi sing disaranake dening instrumen PCR kuantitatif kanggo mbukak maneh eksperimen PCR Wektu Nyata.
