Kit Isolasi RNA Total Tanduran Ditambah Kit Purificaiton RNA Total kanggo Tanduran Kaya Polisakarida lan Polifenol
Deskripsi Kit:
Nomer Cat.RE-05021/05022/05024
Kanggo pemurnian total RNA saka conto tanduran umum sing ngemot komponen polisakarida lan polifenol sing dhuwur.
Ekstrak RNA total kanthi cepet saka sampel tanduran kanthi kandungan polisakarida lan polifenol sing dhuwur.
RNase-Free Nggunakake Kolom DNA-Cleaning
Prasaja-kabeh operasi rampung ing suhu kamar
Cepet-operasi bisa rampung ing 30 menit
Aman-ora ana reagen organik sing digunakake 
Spesifikasi
50 Preps, 200 Preps
Kit kasebut nggunakake kolom spin lan rumus sing dikembangake dening Foregene, sing bisa ngekstrak RNA total kanthi kemurnian lan kualitas dhuwur saka macem-macem jaringan tanduran kanthi polysaccharides utawa polyphenols sing dhuwur.Nyedhiyakake kolom DNA-Cleaning sing bisa kanthi gampang mbusak DNA genom saka supernatant lan lisat jaringan.Kolom RNA mung bisa ngiket RNA kanthi efektif.Kit kasebut bisa ngolah pirang-pirang conto ing wektu sing padha.
Kabeh sistem ora ngemot RNase, mula RNA sing wis diresiki ora bakal rusak.Buffer PRW1 lan Buffer PRW2 bisa njamin yen RNA sing dipikolehi ora kena kontaminasi protein, DNA, ion, lan senyawa organik.
Komponen kit
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| ddH Bebas RNase2O, Kolom Pembersihan DNA |
| RNA-Mung Column |
Fitur & kaluwihan
■ Operasi ing suhu kamar (15-25 ℃) saindhenging kabèh proses, tanpa perlu es lan centrifugation suhu kurang.
■ Kit Lengkap RNase-Free, ora perlu kuwatir bab degradasi RNA.
■ Utamané cocog kanggo pemurnian RNA saka conto tanduran polisakarida lan polifenol.
■ DNA-Cleaning Column khusus ngiket DNA, supaya kit bisa mbusak kontaminasi DNA genomik tanpa nambah DNase.
■ Ngasilake RNA dhuwur: Kolom mung RNA lan formula unik bisa ngresiki RNA kanthi efisien.
■ Kacepetan cepet: gampang dioperasi lan bisa rampung sajrone 30 menit.
■ Keamanan: ora ana reagen organik sing dibutuhake.
■ Kualitas dhuwur: Fragmen RNA sing diresiki nduweni kemurnian dhuwur, bebas saka protein lan impurities liyane, lan bisa ketemu macem-macem aplikasi eksperimen hilir.
Parameter produk
■ Aplikasi hilir: sintesis cDNA untaian pertama, RT-PCR, kloning molekuler, Northern Blot, lsp.
■ Sampel: Jaringan tetuwuhan seger utawa beku saka polisakarida lan polifenol
■ Dosis: 50mg jaringan tanduran
■ Kapasitas ikatan RNA maksimum kolom pemurnian: 80 μg
■ Volume elusi: 50-200 μl
Aplikasi kit
Cocog kanggo ekstraksi lan pemurnian total RNA saka conto jaringan tanduran seger utawa beku (utamane jaringan godhong tanduran seger) kanthi kandungan polisakarida lan polifenol sing dhuwur.
Aliran kerja
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus ngolah 50mg godhong seger saka polisakarida lan polifenol, lan 5% RNA dimurnèkaké diuji kanthi elektroforesis.
1: gedhang
2: Ginggo
3: Katun
4: pomegranate
Panyimpenan lan urip beting
Kit iki bisa disimpen nganti 24 sasi ing kahanan garing ing suhu kamar (15-25 ℃);yen perlu kanggo disimpen kanggo wektu maneh, bisa disimpen ing 2-8 ℃.
Buffer PSL1 bisa diselehake ing 4 ℃ kanggo 1 sasi sawise nambah β-mercaptoethanol (disaranake kanggo nambah ing wektu sing padha eksperimen).
Kolom kasebut dipasang
Sawise kolom dipasang, asil RNA dikurangi utawa malah ora mungkin kanggo ngresiki RNA, lan massa RNA sing dipikolehi kurang.
Analisis sabab umum:
1. Sample break ora pepek.
Pemecahan sampel ora rampung nyebabake COLUMN PEMBERSIH DNA diblokir, nanging uga mengaruhi asil lan kualitas RNA.Disaranake operasi mecah kanthi cepet ing nitrogen Cairan cekap nalika nyuwil conto, Coba crush tembok sel sampel, membran sel lan jaringan liyane.Kanggo conto tanduran polyol polysaccharides, disaranake sampeyan nggunakake Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Nalika nyedhot sampel supernatant kapisah karo DNA-Cleaning Column, sel bisa fragmented precipitate bisa inhaled.
Sedimen pecahan sel sing dijupuk bakal nyebabake Kolom RNA-ONLY sing bakal diblokir nalika operasi adsorpsi RNA ditindakake (pirsani langkah 6).Disaranake sampeyan kanthi ati-ati nalika nyedhot supernatan iki supaya ora nyedhot puing sel.
3. Sample jumlah dhisikan kakehan.
Panggunaan sampel sing berlebihan bakal nyebabake fragmentasi sampel sing ora lengkap utawa lisis sel sing ora lengkap dening Buffer PSL1, sing nyebabake penyumbatan kolom pemurnian sajrone dimurnèkaké.Kit Isolasi RNA Total Tanduran Saben sampel operasi sing dimurnikan yaiku 50 mg.Kanggo conto tanduran polyol polysaccharides, disaranake sampeyan nyoba Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Suhu centrifuge kurang banget.
Proses isolasi lan pemurnian RNA kabeh ditindakake ing suhu kamar (20-25°C), kajaba jaringan sampel rusak dening nitrogen cair. Suhu sawetara centrifuges cryogenic luwih murah tinimbang 20℃, sing bisa nyebabake blokir Kolom Pembersihan DNA lan/utawa Kolom Mung RNA.Yen mengkono, nyetel suhu centrifuge kanggo 20-25℃, lanpriksa manawa campuran lisis lan/utawa supernatan sing ditambahake etanol wis digawe panas nganti 37°C.
Ora ana RNA sing diekstrak utawa ngasilake RNA kurang
Biasane akeh faktor sing mengaruhi efisiensi pemulihan, kayata: konten sampel RNA, metode operasi, volume elusi, lsp.
Analisis sabab umum kaya ing ngisor iki:
1.Adus es utawa sentrifugasi suhu kurang (4°C) ditindakake sajrone operasi kasebut.
Saran: Operasi ing suhu kamar (15-25°C) ing kabeh proses, aja nindakake adus es lan sentrifugasi suhu rendah.
2.RNA wis rusak amarga pengawetan sampel sing ora bener utawa pengawetan sampel jangka panjang.
Rekomendasi: Sampel sing anyar diklumpukake kudu cepet beku ing nitrogen cair, lan banjur disimpen ing -80 ° C kanggo dangu, supaya bola beku lan thawing saka conto;utawa langsung rendhem conto ing larutan RNA stabilizer RNAlater (conto kewan).
3. Fragmentasi sampel lan lisis sing ora cukup nyebabake penyumbatan kolom pemurnian.
Saran: Nalika nggiling jaringan, priksa manawa jaringan wis cukup lemah, lan cepet pindhah menyang Buffer PSL1 sing wis disiapake (konfirmasi yen proporsi β-ME sing bener wis ditambahake, deleng langkah 1 saka prosedur).
4. Eluent ditambahake salah.
Saran: Priksa manawa RNase-Free ddH2O netes menyang tengah membran kolom pemurnian.
5.Volume bener saka etanol Absolute iki ora ditambahake menyang Buffer PSL2 utawa Buffer PRW2.
Saran: Tututi pandhuane, tambahake volume etanol absolut sing bener menyang Buffer PSL2 lan Buffer PRW2 lan aduk kanthi becik sadurunge kit digunakake.
6. Jumlah sampel jaringan ora cocog.
Saran: Gunakake 50 mg jaringan saben 500 μl Buffer PSL1.Nggunakake jaringan sing akeh banget bakal nyuda jumlah RNA sing diekstrak lan kemurnian RNA sing diasilake uga bakal suda.Disaranake supaya dosis sampel awal ora ngluwihi 50 mg saben operasi ekstraksi RNA.
7. Volume elusi sing ora cocog utawa elusi sing ora lengkap.
Saran: Volume eluen kolom pemurnian yaiku 50-200 μl;yen efek elusi ora marem, dianjurake kanggo ngluwihi wektu ing suhu kamar sawise nambah preheated RNase-Free ddH2O, kayata 5-10min.
8.Kolom pemurnian nduweni residu etanol sawise dicuci nganggo BufferPRW2.
Saran: Yen tabung kosong wis centrifuged kanggo 1 min lan isih ana etanol isih sawise ngumbah ing Buffer PRW2, sampeyan bisa nambah wektu centrifugation tabung kosong kanggo 2 min, utawa nyeleh kolom dimurnèkaké ing suhu kamar kanggo 5 min kanggo kebak mbusak etanol ampas.
9. Kit iki digunakake salah.
Saran: Kanggo conto tanduran polisakarida polifenolik, nggunakake kit umum kayata Kit Isolasi RNA Total Tanduran bisa uga ora bisa njupuk conto RNA sing cocog.Disaranake sampeyan nggunakake Plant Total RNA IsolationKit Plus, sing dirancang khusus kanggo conto tanduran polyphenolic polysaccharide.Kit sing dikembangake khusus kanggo ngekstrak RNA saka conto tanduran polifenol lan polisakarida.
Nilai OD260/OD280 kurang
Elusi RNA kanthi ddH2O lan digunakake kanggo maca spektrofotometer ngasilake nilai OD260/OD280 sing kurang.Disaranake nggunakake 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (tinimbang RNase-Free ddH2O kanggo elute RNA) kanggo entuk nilai OD260/OD280 sing relatif bener, deleng "Konsentrasi RNA lan Uji Pemurnian" ing kaca 19.
RNA sing diresiki didegradasi
Kualitas RNA sing diresiki ana gandhengane karo faktor kayata pengawetan sampel, kontaminasi RNase, lan manipulasi.
Analisis sabab umum:
1.Sampel jaringan ora disimpen ing wektu sawise koleksi.
Rekomendasi: Yen conto tissue ora digunakake ing wektu sawise koleksi, mangga simpen ing nitrogen Cairan ing suhu kurang langsung utawa transfer menyang -80 ° C kanggo panyimpenan long-term sawise beku cepet ing nitrogen Cairan, utawa langsung kacemplungaken conto ing RNA stabilizer solusi RNAlater (conto kewan ).Kanggo ekstraksi RNA, coba gunakake conto jaringan sing anyar diklumpukake.
2. Pembekuan lan thawing sampel jaringan sing bola-bali.
Saran: Nalika nyimpen conto jaringan, luwih becik dipotong dadi potongan-potongan cilik kanggo pengawetan, lan njupuk bagean kasebut nalika digunakake kanggo ngindhari degradasi RNA sing disebabake dening pembekuan lan pencairan sing bola-bali.
3. RNase dikenalake ing kamar operasi utawa ora nganggo sarung tangan, topeng, lsp.
Saran: Eksperimen ekstraksi RNA paling apik ditindakake ing operasi RNA sing kapisah, lan meja laboratorium kudu diresiki sadurunge eksperimen, lan sarung tangan lan topeng sing bisa digunakake sajrone eksperimen supaya ora ana degradasi RNA sing disebabake dening introduksi RNase nganti paling gedhe.
4.Reagen wis ono racune dening RNase sak nggunakake.
Saran: Ganti karo seri anyar kit ekstraksi RNA total tanduran kanggo eksperimen sing gegandhengan.
5. Tabung centrifuge lan tip pipette sing digunakake kanggo manipulasi RNA wis kontaminasi karo RNase.
Saran: Priksa manawa tabung centrifuge, tip pipette, pipette, lan sapiturute sing digunakake ing ekstraksi RNA kabeh bebas RNase.
Instruksi Manual:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus Instruction Manual
