Kit Isolasi DNA Buccal Swab/Kartu FTA Kit Ekstraksi DNA Genomik utawa Kit Pemurnian saka Buccal Swab
Deskripsi Kit:
Cepet ngresiki DNA genomik sing berkualitas tinggi saka sampel buccal swab/FTA Card.
◮Ora ana kontaminasi RNase:Kolom DNA-Mung sing diwenehake dening kit ndadekake bisa mbusak RNA saka DNA genom tanpa nambah RNase sajrone eksperimen, nyegah laboratorium ora kena kontaminasi dening RNase eksogen.
◮Kacepetan cepet:Foregene Protease nduweni aktivitas sing luwih dhuwur tinimbang protease sing padha, lan nyerna sampel jaringan kanthi cepet;operasi punika prasaja, lan operasi ekstraksi DNA genomik bisa rampung ing 20-80 menit.
◮trep:Sentrifugasi ditindakake ing suhu kamar, lan ora perlu sentrifugasi suhu rendah 4 ° C utawa presipitasi etanol DNA.
◮Keamanan:Ora ana ekstraksi reagen organik sing dibutuhake.
◮kualitas dhuwur:DNA genomik sing diekstraksi nduweni fragmen gedhe, ora ana RNA, ora ana RNase, lan isi ion sing sithik banget, sing bisa nyukupi syarat saka macem-macem eksperimen.
◮Sistem elusi mikro:Bisa nambah konsentrasi DNA genomik, sing trep kanggo deteksi hilir utawa eksperimen.
Katrangan
Kit iki nyedhiyakake cara sing efisien lan cepet kanggo njupuk DNA genomik konsentrasi dhuwur saka swab bukal lan Kartu FTA (bintik getih).Nggunakake perusahaan kita's unik DNA-mung silika membran spin kolom lan rumus, digabungake karo Foregene Protease, konsentrasi dhuwur, DNA genomik kualitas dhuwur bisa diekstrak ing 80 menit.Kolom pemurnian cilik sing dirancang khusus ngiket DNA genom, lan DNA bisa diencerake kanthi jumlah cilik (15μl) sistem elusi kanggo nambah konsentrasi DNA genomik sing dipikolehi, sing trep kanggo deteksi utawa eksperimen hilir.Kit bisa ngolah siji utawa luwih conto sekaligus, lan proses pemurnian ora mbutuhake ekstraksi bahan organik kayata fenol, kloroform, lan isopropanol utawa udan etanol sing akeh wektu, lan operasi kasebut gampang lan ngirit wektu.
Spesifikasi
50 Persiapan
Komponen kit
| Penyangga ST1 |
| Penyangga ST2 |
| Akrilamida linier |
| Penyangga PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregene Protease |
| Kolom Mung DNA |
| instruksi |
Fitur & kaluwihan
-Ora ana kontaminasi RNase: Kolom Mung DNA sing diwenehake dening kit ndadekake bisa mbusak RNA saka DNA genom tanpa nambah RNase sajrone eksperimen, supaya laboratorium ora kena kontaminasi dening RNase eksogen.
-Kacepetan cepet: Foregene Protease nduweni aktivitas sing luwih dhuwur tinimbang protease sing padha, nyerna conto kanthi cepet;operasi prasaja.
-Trep: Centrifugation dileksanakake ing suhu kamar, lan ora perlu kanggo 4 ° C sentrifugasi suhu kurang utawa udan etanol DNA.
-Safety: Ora ana ekstraksi reagen organik sing dibutuhake.
-Kualitas dhuwur: DNA genomik sing diekstrak nduweni fragmen gedhe, ora ana RNA, ora ana RNase, lan isi ion sing sithik banget, sing bisa nyukupi syarat saka macem-macem eksperimen.
-Sistem micro-elution: Bisa nambah konsentrasi DNA genomik, sing trep kanggo deteksi hilir utawa eksperimen.
Aplikasi kit
Cocog kanggo pemurnian DNA genom saka conto ing ngisor iki: swab buccal, Kartu FTA (noda getih).
Panyimpenan lan urip beting
-Kit iki bisa disimpen nganti 12 sasi ing kahanan garing ing suhu kamar (15-25 ° C);yen perlu disimpen kanggo wektu sing luwih suwe, bisa disimpen ing suhu 2-8 ° C.
Cathetan: Yen disimpen ing suhu sing sithik, solusi kasebut rawan udan.Sadurunge nggunakake, mesthine kanggo nyelehake solusi ing kit ing suhu kamar kanggo sawetara wektu.Yen perlu, preheat ing adus banyu 37 ° C kanggo 10 menit kanggo dissolve precipitate, lan nyampur sadurunge digunakake.
-Foregene Protease solusi duwe rumus unik, kang aktif nalika disimpen ing suhu kamar kanggo dangu (3 sasi);aktivitas lan stabilitas bakal luwih apik yen disimpen ing 4 ° C, supaya dianjurake kanggo nyimpen ing 4 ° C, elinga ora kanggo nyimpen ing -20 ° C.
Kolom pemurnian macet
Ing kit iki, ing operasi ekstraksi DNA genomik, kolom pemurnian langsung adsorbed ing sampel campuran lysis enzimatik tanpa langkah centrifugation, lan kolom pemurnian bisa diblokir amarga enzymization pepak lan viskositas dhuwur saka sampel.
Penyebab sing bisa ditindakake yaiku:
1. Pencernaan enzimatik sing ora lengkap saka sampel jaringan.
Rekomendasi: Wektu pangolahan sampel Foregene Protease bisa ditambah kanthi tepat utawa supernatan bisa dijupuk sawise sentrifugasi ing 12.000 rpm (~ 13.400 × g) suwene 5 menit.
2. Kakehan nggunakake sampel jaringan utawa jaringan gedhe.
Rekomendasi: Paling apik ora ngluwihi 1 Buccal swab ing sampel;yen sampel gedhe banget, nambah dosis saka Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 patut.
3. Viskositas sampel dhuwur banget.
Rekomendasi: Sampel bisa diencerake kanthi tepat karo 10 mM Tris-HCl sadurunge ekstraksi DNA genom.
4. Pecahan kertu getih wis disedot.
Rekomendasi: Wektu sentrifugasi transien langkah 6 ekstraksi genom titik getih (Kartu FTA) bisa ditambahi kanthi tepat.
Ngasilake kurang utawa ora ana DNA
Asring ana macem-macem faktor sing mengaruhi ngasilake DNA genom, kalebu asal sampel, kondisi panyimpenan sampel, persiapan sampel, manipulasi, lsp.
DNA genom ora bisa dipikolehi sajrone ekstraksi
Penyebab sing bisa ditindakake yaiku:
1. Pengawetan sampel utawa panyimpenan sing ora bener bisa nyebabake degradasi DNA genomik.
Rekomendasi: Swab oral luwih apik kanggo sampel anyar, lan ora dianjurake nggunakake swab sing diawetake kanggo operasi ekstraksi DNA genomik;sampel titik getih kudu mesthekake yen kualitas qualified lan wektu panyimpenan ngirim ora dawa banget.
2. Panggunaan jaringan sing sithik banget bisa nyebabake ora ana ekstraksi DNA genom sing cocog.
Rekomendasi: Tindakake pandhuan sampling buccal swab ing pandhuan operasi, lan usap kaping pirang-pirang supaya sel sing cukup bisa ditempelake ing swab lisan kanggo ekstraksi DNA genom;kanggo ekstraksi sampel titik getih, area pemotongan titik getih bisa ditambah kanthi tepat.
3. Foregene Protease ora dijaga kanthi bener, nyebabake nyuda aktivitas utawa inaktivasi.
Rekomendasi: Konfirmasi kahanan panyimpenan saka Foregene Protease utawa ngganti karo Foregene Protease anyar kanggo reaksi enzimatik.
4. Pengawetan sing ora bener saka kit utawa wektu panyimpenan dawa banget, nyebabake kegagalan sawetara komponen ing kit.
Rekomendasi: Tuku kit isolasi DNA swab Buccal anyar kanggo prosedur sing gegandhengan.
5. Buffer WB ora nambah etanol mutlak.
Rekomendasi: Konfirmasi yen buffer WB nambahake volume etanol absolut sing bener.
6. Eluent ora ditambahake kanthi bener menyang film silikon.
Rekomendasi: Tambah 65 °C eluen sing wis digawe panas menyang tengah membran silikon lan ninggalake ing suhu kamar suwene 5 menit kanggo nambah efisiensi elusi.
DNA genomik sing kurang ngasilake diisolasi
Penyebab sing bisa ditindakake yaiku:
1. Pengawetan sampel utawa panyimpenan sing ora bener bisa nyebabake degradasi DNA genomik.
Rekomendasi: Swab oral luwih disenengi sampel anyar, lan swab sing diawetake ora bisa digunakake kanggo ekstraksi DNA genom.
2. Yen jumlah sampel jaringan cilik banget, isi DNA genom sing diekstrak bakal kurang.
Rekomendasi: Tindakake pandhuan sampling swab lisan ing pandhuan operasi, usap kaping pirang-pirang supaya sel sing cukup bisa dipasang ing swab lisan kanggo ekstraksi DNA genom.
3. Foregene Protease ora dijaga kanthi bener, nyebabake nyuda aktivitas utawa inaktivasi.
Rekomendasi: Konfirmasi kahanan panyimpenan saka Foregene Protease utawa ngganti karo Foregene Protease anyar kanggo reaksi enzimatik.
4. Masalah eluent.
Rekomendasi: Gunakake Buffer EB kanggo elusi;yen nganggo ddH2O utawa eluen liyane, konfirmasi yen pH eluate ana ing antarane 7.0-8.5.
5. eluate ora bener ditambahake dropwise.
Rekomendasi: Tambah tetes eluent menyang tengah membran silikon lan ninggalake ing suhu kamar nganti 5 menit kanggo nambah efisiensi elusi.
6. Cairan elusi akumulasi sithik banget.
Rekomendasi: Gunakake eluen kanggo elusi DNA genom kaya sing dibutuhake ing pandhuan, paling ora kurang saka 15 μl.
Kemurnian rendah DNA genom sing diisolasi
Kemurnian DNA genomik sing kurang bisa nyebabake kegagalan utawa asil eksperimen hilir sing ora nyenengake, kayata: enzim ora bisa dibukak, PCR ora bisa entuk fragmen gen sing dikarepake, lsp.
Penyebab sing bisa ditindakake yaiku:
1. Heteroprotein polusi, RNA polusi.
Analisis: Kolom pemurnian ora dicuci nganggo Buffer PW;kolom pemurnian wisuh Buffer PW ora sakabeheng nggunakake kacepetan centrifugal bener.
Rekomendasi: Priksa manawa ora ana udan ing supernatant sadurunge nambah etanol;manawa kanggo wisuh kolom dimurnèkaké miturut pandhuan, lan langkah iki ora bisa tilar.
2. Impurity polusi ion.
Analisis: Kolom pemurnian buffer WB diilangi utawa mung dicuci sapisan, nyebabake kontaminasi ionik sisa.
Rekomendasi: Aja manawa kanggo wisuh Buffer WB 2 kaping minangka diarahake kanggo mbusak ion residual sabisa.
3. Kontaminasi enzim RNA.
Analisis: RNases manca ditambahake menyang buffer;Operasi cuci buffer PW ora bener, nyebabake residu RNase, mengaruhi operasi eksperimen RNA hilir, kayata transkripsi in vitro.
Rekomendasi: Kit isolasi asam nukleat seri Foregene bisa mbusak RNA tanpa tambahan RNase, saéngga Kit Isolasi DNA Kartu Swab/FTA ora perlu nambah RNase;dadi manawa kanggo tindakake pandhuan kanggo kolom dimurnèkaké ngumbah Buffer PW, lan langkah iki ora bisa tilar.
4. Sisa etanol.
Analisis: Buffer WB ora nindakake sentrifugasi tabung kosong sawise ngumbah kolom pemurnian.
Rekomendasi: Nindakake operasi centrifugation tabung kosong sing bener miturut pandhuane.
5. Polusi impurity liyane.
Analisis: Sampel sing disimpen utawa conto khusus ora diolah sadurunge.
Rekomendasi: Sak tenane pretreat sampel minangka prentah.
