Kita wis berpengalaman produsen.Menang mayoritas ing sertifikasi penting ing pasar kanggo diskon Big China High Sensitivitas One-Step Probe Rt-QpcrKit V2, Kualitas minangka urip pabrik, Fokus ing panjaluk pelanggan minangka sumber kaslametan lan pangembangan perusahaan, Kita netepi sikap kerja kejujuran lan iman sing apik, ngenteni tekamu!
Kita wis berpengalaman produsen.Wining mayoritas ing sertifikasi wigati saka sawijining pasar kanggoChina Taq DNA Polymerase, Qpcr, Perusahaan kita janji: prices cukup, wektu produksi cendhak lan layanan sawise-sales puas, kita uga welcome sampeyan kanggo ngunjungi pabrik kita ing sembarang wektu sampeyan pengin.Wish saiki kita duwe bisnis penake lan long term bebarengan!!!

Katrangan

Kit iki nggunakake sistem buffer lisis unik sing bisa cepet ngeculake RNA saka sampel sel kultur kanggo reaksi RT-qPCR, saéngga ngilangi proses pemurnian RNA sing akeh wektu lan angel.Cithakan RNA bisa dipikolehi mung 7 menit.Reagen 5×Direct RT Mix lan 2×Direct qPCR Mix-SYBR sing diwenehake dening kit bisa kanthi cepet lan efektif entuk asil PCR kuantitatif wektu nyata.

5×Direct RT Mix lan 2×Direct qPCR Mix-SYBR duwe toleransi inhibitor kuwat, lan lysate saka conto bisa digunakake minangka cithakan kanggo RT-qPCR langsung.Kit iki ngemot RNA high-affinity reverse transcriptase Foregene, lan Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl₂, reaksi buffer, PCR optimizer lan stabilizer.

Spesifikasi

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Komponen kit

Fitur & kaluwihan

■ Prasaja lan efektif : kanthi teknologi Cell Direct RT, conto RNA bisa diduweni mung 7 menit.

■ Panjaluk sampel cilik, nganti 10 sel bisa diuji.

■ throughput dhuwur: bisa cepet ndeteksi RNA ing sel kultur ing 384, 96, 24, 12, 6-sumur piring.

■ DNA Eraser bisa cepet mbusak génom dirilis, nemen nyuda impact ing asil eksperimen sakteruse.

■ Optimized RT lan sistem qPCR ndadekake loro-langkah RT-PCR mbalikke transkripsi luwih efisien lan PCR luwih spesifik, lan luwih tahan kanggo RT-qPCR inhibitor reaksi.

Aplikasi kit

Lingkup aplikasi: sel kultur.

- RNA dirilis dening lysis sampel: mung ditrapake kanggo cithakan RT-qPCR kit iki.

- Kit bisa digunakake kanggo tujuan ing ngisor iki: analisis ekspresi gen, verifikasi efek silencing gen sing dimediasi siRNA, screening obat, lsp.

Diagram

Panyimpenan lan urip beting

Part I saka kit iki kudu disimpen ing 4 ℃;Part II kudu disimpen ing -20 ℃.

Foregene Protease Plus II kudu disimpen ing 4 ℃, ora beku ing -20 ℃.

Reagen 2×Direct qPCR Mix-SYBR kudu disimpen ing -20 ℃ ing peteng;yen digunakake kerep, uga bisa disimpen ing 4 ℃ kanggo panyimpenan short-term (nggunakake munggah ing 10 dina).We wis Produsèn experienced.Menang mayoritas ing sertifikasi wigati saka sawijining pasar kanggo Big discounting China High Sensitivitas Siji-Langkah Probe Rt-Qpcr Kit V2, Quality punika pabrik 'urip, Fokus ing dikarepake customer iku sumber kaslametané perusahaan lan pembangunan, Kita bakal kejujuran lan sikap kerja iman apik, looking nerusake kanggo teka!
Diskon gedheChina Taq DNA Polymerase, Qpcr, Perusahaan kita janji: prices cukup, wektu produksi cendhak lan layanan sawise-sales puas, kita uga welcome sampeyan kanggo ngunjungi pabrik kita ing sembarang wektu sampeyan pengin.Wish saiki kita duwe bisnis penake lan long term bebarengan!!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Taqman

Cat.No.DRT-01021/01022

Kanggo sel langsung RT-qPCR nggunakake ≤ 1000.000 sel

introduksi produk

Produk iki nggunakake sistem buffer lysis unik kanggo cepet nerbitaké RNA saka sampel sel kultur kanggo reaksi RT-qPCR, ngilangke proses pemurnian RNA wektu-akeh lan laborious, lan mung 7 menit kanggo diwenehi cithakan RNA dibutuhake, karo 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman kasedhiya dening kit bisa cepet lan efisien asil PCR wektu nyata.

5 × Direct RT Mix lan 2 × Direct qPCR Mix-Taqman duwe toleransi inhibitor kuwat lan bisa nindakake kuwalikan efisien lan amplifikasi tartamtu nggunakake lysate saka sampel kanggo diukur minangka cithakan.Reagen ngandhut Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl₂, Reaksi Buffer, PCR Optimizer lan Stabilizer, kang bisa digunakake karo lysis buffer kanggo cepet lan gampang ndeteksi conto, lan nduweni karakteristik sensitivitas dhuwur, specificity lan stabilitas.

Fitur produk

Teknologi Cell Direct RT sing prasaja lan efektif sing mbutuhake 7 menit kanggo njupuk conto RNA.

Syarat sampel cilik, lan minimal 10 sel kultur bisa digunakake kanggo eksperimen.

throughput dhuwur kanggo akuisisi RNA cepet saka sel kultur kayata 384, 96, 24, 12, lan piring 6-sumur.

DNA Eraser bisa kanthi cepet mbusak génom sing diluncurake, nyuda impact ing asil eksperimen sakteruse.

Sistem RT lan qPCR sing dioptimalake mbisakake RT-PCR rong langkah kanthi transkripsi terbalik, kekhususan, lan toleransi inhibitor reaksi RT-qPCR sing luwih efisien.

Aplikasi kit

Lingkup aplikasi: Sel kultur.

Lisis sampel diinterpretasikake RNA: digunakake mung minangka cithakan RT-qPCR rong langkah.

Kit bisa digunakake kanggo tujuan ing ngisor iki: analisis ekspresi regulasi gen, uji alel, skrining obat, lsp.

watesan Kit

Fragmen amplifikasi ≤ 300 bp.

Kit digunakake kanggo kultur sel anyar.

Kontrol kualitas produk

Miturut Sistem Manajemen Kualitas Total FOREGENE, saben kumpulan kit seri Cell Direct RT-qPCR diuji kanthi ketat kaping pirang-pirang kanggo njamin linuwih lan stabilitas kualitas saben kumpulan kit.

Isi kit

*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman bisa dituku kanthi kapisah, rincian kasedhiya ing Lampiran 1 (PAGE 13).

Kondisi panyimpenan

1. Ketentuan Pengiriman

Proses kabeh transportasi kothak paket es suhu rendah, kanggo mesthekake yen kit kasebut ana ing negara <4 °C.

2. kahanan panyimpenan

Simpen bagean I ing 4 ° C lan Part II ing -20 ° C.

Foregene Protease Plus II kudu disimpen ing 4 ° C, ora beku ing -20 ° C.

Reagen 2× Direct qPCR Mix-Taqman disimpen ing -20 ° C, utawa ing 4 ° C kanggo nggunakake short-term yen digunakake kerep (ing 10 dina).

Informasi komponen kit

Buffer CL: Nyedhiyani lingkungan sing dibutuhake kanggo reaksi lisis sel.

Buffer ST: mungkasi zat aktif ing lysate supaya efek ing RT sakteruse.

DNA Eraser: DNA remover, efek mbusak génom ing eksperimen sakteruse.

5× Direct RT Mix: Ngandhut afinitas RNA dhuwur Foregene Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, dNTPs, stabilisator, enhancer, optimizer, lan primer transkripsi mbalikke kanggo keselarasan optimal (Random Primer, Oligo(dT)₁₈Primer).

Foregene Protease Plus II: Ing konteks buffer lisis, sel-sel dilisis kanggo ngeculake asam nukleat.

2× Direct qPCR Mix-Taqman: Reagen iki ngandhut Hot D-Taq DNA Polimerase, dNTPs, MgCl₂, reaksi buffer, PCR optimizer, lan stabilizer.

Pewarna Referensi 20 × ROX: Umume digunakake ing instrumen amplifikasi PCR Real Time ABI, Stratagene lan perusahaan liyane, digunakake kanggo nyetel prabédan antarane tabung PCR lan tabung sing disebabake kesalahan dosis PCR.Konsentrasi Dye Referensi 20 × ROX sing dibutuhake kanggo macem-macem instrumen beda-beda, lan pangguna bisa nambah miturut konsentrasi instrumen sing disaranake.

ddH Bebas RNase₂O: Banyu ultra murni sing disterilisasi bebas RNase kanggo reaksi RT-qPCR rong langkah.

Cegahan:(Pasthekake maca pancegahan kasebut kanthi teliti sadurunge nggunakake kit)

Pay manungsa waé kanggo cara operasi saka eksprimen kanggo ngindhari kontaminasi silang antarane conto.

Elinga kebersihan lingkungan eksperimen lan peralatan supaya ora kontaminasi RNase lan degradasi RNA.

Njupuk conto sel sing seger utawa sing diawetake kanthi apik lan aja nganggo conto sel sing dicairake beku bola-bali.

5× Direct qPCR Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman kudu ngindhari beku-thaw bola-bali, yen ora bakal mengaruhi transkripsi mbalikke lan efisiensi PCR.

Prepajatahsadurungeoperasi

Pesthekake maca instruksi kasebut kanthi teliti sadurunge nggunakake kit iki.Cell Direct RT-qPCR Kit prasaja, trep, lan cepet operate, lan instruksi menehi informasi lengkap babagan kabeh kit lan carane nggunakake bener.Mangga nyiyapake bahan lan peralatan eksperimen sing dibutuhake sadurunge digunakake.

Bahan lan peralatan eksperimen

◆ Sel kultur.

◆ 1,5 ml utawa 2 ml, tabung centrifuge RNase-/DNase-Free, ujung RNase-/DNase-Free, tabung qPCR steril 0,2 ml.

◆ mesin qPCR, pipet, centrifuge meja (≥13.400×g) (gumantung kabutuhan eksperimen), lsp.

Safety

◆ Produk iki mung kanggo riset ilmiah, aja digunakake kanggo tujuan farmasi, klinis, panganan lan kosmetik.

◆ Nalika nggunakake bahan kimia, nganggo sandhangan lab, sarung tangan, kaca tingal protèktif, etc.

Operasipanuntun

Sistem Lisis Sel, sistem RT, lan paket suplemen solusi reaksi qPCR bisa dituku kanthi kapisah, kanggo rincian ing Lampiran 1 (PAGE 13).

Pandhuan operasi

A: Sampel RNA release

1.Sel padha pretreated: Cuci piring kultur sel karo PBS kadhemen, banjur lyse sel (10-10⁶), 10⁶ tinimbang jumlah sel, dianjurake Foregene Cell lan Kit Isolasi RNA Total (DE-03111) utawa Kit Isolasi RNA Total Animal (DE-03011) kanggo ekstraksi lan pemurnian RNA.

1.1.Sel adherent (24-well plate minangka conto)

1.1.1.Temtokake jumlah sel ing saben sumur, nemtokake jumlah sel yaiku 1 × 10⁵, lan nggunakake pipette kanggo mbusak medium budaya saka sajian budaya.

1.1.2.Tambahkan 200 μl pre-chilled 1 × PBS ke setiap sumur.Aja pipet bola-bali lan copot PBS saka sumur.Ngiringake piring lan copot PBS sabisa.Terusake menyang langkah 2.

1.1.3.Piring kultur sel sing beda utawa tabel nomer referensi 1-1 ing piring kultur sel ditambahake precooled 1 × PBS kanggo ngumbah sel.

Tabel 1-1: Dosis PBS kanggo macem-macem jumlah sel

Cathetan:Kanggo njamin sel adherent tenan,jumlah gedhe saka mundhut sel nyingkiri nalika wisuh.

1.2.Sèl suspensi utawa sel adherent dikultur ing piring non-porous

1.2.1.Sèl adherent sing dibudidaya ing piring sumur non-multi (sel suspensi diwiwiti saka langkah sabanjure 1.2.2), ngumpulake lan misahake sel miturut cara koleksi sel normal, lan nyelehake ing piring budaya utawa tabung centrifuge;yen trypsinization digunakake, mbutuhake centrifugation kanggo ngumpulake sel lan mbusak tripsin ampas, ditambahake PBS sel resuspended menyang sel individu kanggo mbubarake sel.

1.2.2.Sawise jumlah sel diitung, sel aliquoted 1 × 10⁵ siji menyang tabung centrifuge, ngumpulake sel kanthi sentrifugasi ing 1000 × g kanggo 10 menit.

1.2.3.Tambah 200 μl PBS menyang tabung centrifuge, aja pipet bola-bali, lan langsung aspirate PBS.nerusake menyang langkah 2. (Yen angel kanggo precipitate lan sel padha resuspended maneh, bisa dileksanakake 1000 × g centrifuged 10 menit sawise discarding supernatant, sel pelet nerusake kanggo langkah 2)

2.Lisis sel: Copot Buffer CL, suhu sawijining imbang kanggo suhu kamar, DNA Eraser lan Foregene Protease Plus II, miturut Tabel ing ngisor iki 1-2 sistem lysis disiapake: (Solusi Lysis siap kanggo nggunakake).

Tabel 1-2: cleavage preparation sistem (Cathetan: ing preparation ing es)

3. ( 24 – well plate minangka conto ) Pipet 200 μl cell lysis master mix menyang saben sumur, bola-bali nyebul 5-10 kaping, Inkubasi ing suhu kamar (20-25 ℃) kanggo 5 menit.

Cathetan:Kanggo supaya tatanan saka umpluk, please nalika pipetting ukuran pipette diatur kanggo 200μl utawa kurang.Sel bisa katon mendhung sawise lisis, sing normal.

4. (24-well plate minangka conto) ditambahake ing Cairan 20 μl Buffer ST (sistem lisis beda Buffer ST ditambahake ing jumlah ditampilake ing Tabel 1-3), bola pipetting 5-10 kaping, ing suhu kamar (20-25 ℃) inkubasi kanggo 2 min.

Cathetan:Tip pipette dibuwang ing ngisor permukaan, supaya lysate ditambahake,supaya tatanan saka umpluk, please nalika pipetting ukuran pipette diatur kanggo 200μl utawa kurang.

Tabel 1-3:Tambah Buffer ST

5.Lysate digunakake kanggo nyobi RT-qPCR sakteruse.Yen nyobi sakteruse ora bisa dileksanakake ing wektu, please tetep ing es kanggo ora luwih saka 2hr, lan nyimpen ing -20 ℃ utawa -80 ℃ (ora luwih saka telung sasi).

B: Persiapan sistem RT

1. Njupuk metu 5 × Direct RT Mix lan sijine iku ing adus es, supaya iku nyawiji alamiah, lan alon-alon nyampur kanggo nggunakake mengko;njupuk RNase-Free ddH2O lan nyawiji lan nyelehake ing adus es kanggo nggunakake mengko.Siapke sistem reaksi ing es miturut Tabel 2-1 ing ngisor iki.

Tabel 2-1: Persiapan sistem reaksi RT

2.Sawise completion saka ngrumusake sistem, alon-alon pipis lan centrifuged sedhela ing Tabel ing ngisor iki 2 -2 kahanan reaksi reaksi RT.

Tabel 2-2: setelan kahanan Reaksi RT

3.After completion saka reaksi, produk reaksi diselehake langsung ing es kanggo qPCR, mangga sijine pengawetan long-term -20 ℃ utawa -80 ℃ .

Cathetan: Amarga nggunakake cithakan sing ora diresiki, endapan putih bisa uga katon ing produk transkripsi mbalikke.Iki minangka fenomena normal.Centrifuge supernatant langsung kanggo eksperimen sakteruse.

Solusi reaksi RT sing diasilake ditambahake menyang sistem reaksi PCR Wektu Nyata Langkah sabanjure, dianjurake kanggo nambah jumlah saka 10-30% saka sistem reaksi.

C: persiapan sistem reaksi qPCR

1.Jumlah B sing cocog disiapake ing cithakan cDNA langkah miturut tabel ing ngisor iki 3-1 kanggo nyiapake sistem reaksi.

Cathetan: Jumlah cithakan cDNA kalebu 10-30% saka sistem qPCR.Contone, ing sistem qPCR 20μl, nambah 2-6 μl buffer lisis, nanging ora luwih saka 6 μl.

2.Kondhisi optimasi qPCR sing apik (suhu annealing, lsp.) kanggo reaksi qPCR (Kondisi reaksi sing diwenehake ing Tabel 3-2).

Cathetan: Coba gunakake kahanan sing dioptimalake kanggo reaksi qPCR kanggo entuk asil sing luwih apik.

Tabel 3-1: Persiapan sistem reaksi PCR

1*: Konsentrasi primer bisa diatur ing kisaran 50-900 nM nalika kinerja reaksi primer kurang.

Cathetan: Sistem qPCR bisa diatur miturut kabutuhan eksperimen lan model siklus fluoresensi.Kanggo qPCR ing 50μl sistem, nyetel dosis reagen kanthi proporsional miturut 20μl sistem.

2*: Pilih konsentrasi pungkasan cocok ROX Reference Dye miturut fluoresensi kuantitatif cycler termal.Konsentrasi Pewarna Referensi ROX sing paling cocok kanggo siklus kuantitatif fluoresensi umum ditampilake ing tabel ing ngisor iki:

Tabel 3-2: kahanan reaksi qPCR diwenehake

Cathetan: Kanggo entuk efek qPCR sing paling apik, PCR gradien bisa digunakake kanggo ngoptimalake kahanan reaksi kanggo template sing beda lan primer sing beda.Kondisi reaksi PCR beda-beda gumantung saka analisa fluoresensi, cithakan, sepisanan, lan liya-liyane. Ing operasi tartamtu, kondisi reaksi optimal kudu dirancang miturut kondisi tartamtu saka siklus termal kuantitatif fluoresensi, jinis cithakan, ukuran fragmen kapentingan, urutan dhasar saka pecahan digedhèkaké lan isi GC lan dawa primers, kalebu suhu annealing, wektu reaksi, etc.

Prinsip desain primer PCR Real Time

Maju Primer lan Reverse Primer

Kanggo Real Time PCR, desain primer penting banget.Primer ana hubungane karo spesifik lan efisiensi amplifikasi PCR, lan bisa dirancang kanthi referensi kanggo prinsip ing ngisor iki:

◆ Dawane primer: 18-30bp.

◆ Isi GC: 40-60%.

◆ Nilai Tm: Piranti lunak desain Primer, kayata Primer 5, bisa menehi nilai Tm saka primer.Nilai Tm saka primer hulu lan hilir kudu cedhak.Rumus pitungan Tm uga bisa digunakake: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Nalika nindakake PCR, suhu ing ngisor nilai Tm primer 5 °C umume dipilih minangka suhu anil (kenaikan suhu anil sing cocog bisa nambah kekhususan reaksi PCR).

◆ Primer lan produk PCR:

◆ Desain primer amplifikasi PCR dawa produk luwih apik 100-150bp.

◆ Desain primer ing area struktur sekunder saka cithakan kudu dihindari sabisa.

◆ Aja mbentuk 2 utawa luwih basa komplementer ing antarane ujung 3' primer hulu lan hilir.

◆ Primer 3′ pangkalan terminal ora bisa ana karo 3 G utawa C berturut-turut tambahan.

◆ Primer dhewe ora bisa duwe struktur pelengkap, yen ora, struktur jepit rambut bakal dibentuk, nyebabake amplifikasi PCR.

◆ ATCG kudu disebarake kanthi merata ing urutan primer, lan basis terminal 3′ kudu dihindari minangka T.

Lampiran1:Clangsung waeRT-qPCR Kit komponent paket tambahan

1. Solusi Lisis Sel