RNase minangka tembung sensitif sing akeh siswa sing kerep nindakake eksperimen ekstraksi RNA ora pengin dirungokake.Kanthi bersenjata lengkap, RNA sing pungkasane diekstrak nganggo reagen fenol lan kloroform sing beracun banget dirusak.Aku ora rukun!!!Dina iki, ayo goleki asal-usul Rnase sing misuwur.

Ribonuclease (RNase), utawa RNase, minangka nuklease sing bisa nghidrolisis RNA dadi molekul cilik.RNase, minangka protein molekul cilik, stabil banget .Suhu dhuwur konvensional lan sterilisasi uap tekanan dhuwur lan inhibitor protein ora bisa mateni kabeh.Stabilitas RNase utamané asalé saka ikatan disulfida ing struktur.Contone, RNase pankreas sapi sing umum digunakake mung duwe 124 asam amino, nanging ngemot 4 ikatan disulfida.Ikatan belerang lan ikatan disulfida nyedhiyakake RNase kanthi stabilitas termal sing apik banget.Kajaba iku, rnase nduweni bobot molekul sing relatif cilik lan bisa kanthi cepet mulihake konformasi asli ing pirang-pirang kasus.

Saliyane banget stabil,RNases ana ing ngendi-endi ing laboratorium .RNase minangka mekanisme pertahanan biologis.Kanggo sel, RNA eksogen asring fatal.Dibandhingake karo DNA eksogen, RNA eksogen asring luwih mbebayani.RNA kanthi seneng ditranskripsi lan diterjemahake, mula meh kabeh organisme wis ngevolusi RNases kanggo mbela saka invasi RNA eksogen.Mula, sel bakteri sing dibudidayakake ing laboratorium lan sampeyan sing ngekstrak RNA ngasilake aroma RNase.Cairan awak manungsa (idu, luh, lsp.) ngemot jumlah RNase sing akeh, mula aja nangis nalika RNA rusak.Luwih akeh sampeyan nangis, luwih elek degradasi RNA!!Dhik Daiyu ora cocok kanggo ekstraksi RNA!

Kajaba iku, kulit alus sampeyan uga ngandhut akeh RNase, lan spidol, pipette, lawang kulkas, lan gagang lawang sing wis kena kulit uga ngemot RNase.

Kanthi akeh banget rambling, ayo goleki carane ngatasi RNases.

Babagan pisanan sing dipikirake saben wong nalika ngilangi RNA yaikuDEPC(dietil pirokarbonat).DEPC utamane denaturasi protein kanthi gabung karo cincin imidazole saka histidine grup aktif RNase, saéngga nyegah aktivitas enzim kasebut.0,1% DEPC bisa duwe efek njabut luwih apik ing Rnase, nanging kita kudu mbayar manungsa waé sing DEPC punika karsinogen dikenal, supaya manungsa waé khusus kudu mbayar nalika nggunakake.

Kanggo RNase, kita kudu miwiti saka rong aspek,sing pisanan yaiku nyandhet aktivitas RNase endogen

Reagen ekstraksi RNA konvensional kayata guanidine isothiocyanate lan DTT sing ana ing Trizol bisa mbukak ikatan disulfida RNase, nanging isih ana sawetara RNase, utamane ing conto jaringan, mula kudu digatekake suhu sing sithik.

1.Langsung kacemplungaken sampel jaringan ing nitrogen cair sawise njupuk metu, utawa ing solusi pengawetan RNA komersial.

2.Sawise ngekstrak RNA saka sampel sel, ditambahake menyang larutan lisis lan lyse ing kothak es.

3. Paling apik nggunakake nitrogen cair kanggo mecah nalika sampel jaringan homogen.Nalika nggunakake homogenizer listrik tanpa nitrogen Cairan, mbayar manungsa waé kanggo kebak wis cooling adaptor homogenate.

Kapindho yaiku DNase eksogen

1.Dadi bersenjata lengkap, nganggo jas lab, nganggo topeng, lan manawa nganggo sarung tangan anyar (aja ngirit banget !! Sampeyan kudu dicathet yen Trizol super korosif, lan uga kuwat banget liwat sarung tangan, mula aja netes ing tangan sampeyan).

2.Kabeh tip pipette sing digunakake, tabung EP, tabung PCR lan peralatan liyane kudu diobati de-RNase.Bisa direndhem ing 0,1% DEPC lan banjur ditekan ing tekanan dhuwur.Pay manungsa waé menyang operasi ing hood asap.Tiran lokal bisa langsung tuku bahan bakar kanggo mbusak enzim.

PS: Ayo kula pitutur marang kowe cara kesed.Senajan suhu dhuwur lan meksa dhuwur ora bisa rampung mbusak RNase, iku bakal mbusak bagean gedhe saka iku.2 kaping suhu dhuwur lan tekanan dhuwur duweni efek sing apik, lan ekstraksi RNA ora duwe pengaruh.

3.Alkohol bisa denaturasi protein,supaya meja ekstraksi RNA bisa dibusak nganggo alkohol 75%. , lan sarung tangan uga bisa disemprotake karo alkohol.

4.Solusi larut RNA pungkasan lan tabung centrifuge uga kudu diobati de-RNase.Banyu DEPC minangka solusi larut RNA sing umum digunakake.Ayo ngobrol babagan cara nyiapake banyu DEPC sing bener (elinga kanggo ngemas ulang DEPC komersial nalika sampeyan tuku)

Tambah DEPC menyang banyu ultrapure ing 1:1000, goyangake kanthi apik, ayo sewengi ing 37 ° C, lan sterilize ing 121 ° C ing suhu dhuwur lan tekanan dhuwur kanggo 15 menit.Banyu DEPC bisa disimpen ing -20 ° C ing aliquot 1ml.

Pungkasan, kanggo nyimpulake: suhu rendah minangka kunci, barang-barang sing bisa dienggo ditangani kanthi apik, bersenjata lengkap lan kurang ngobrol!

Nah, iku kanggo strategi dina iki.Muga-muga sampeyan kabeh konsentrasi lan kemurnian RNA sing sampeyan sebutake.Loro-lorone A260 / A280 yaiku 2.0!!!

Mesthi, yen sampeyan nggunakake akit ekstraksi RNA operasi suhu kamar, sampeyan bisa uga ora nemoni masalah ing ndhuwur.

Operasi ing suhu kamar, tanpa nambah DNase, ngekstrak total RNA saka sel sajrone 11 menit, lan ngekstrak total RNA saka jaringan kewan utawa tanduran sajrone 30 menit.

Kanggo conto uji coba, hubungi:overseas@foregene.com

Produk sing gegandhengan:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/