Transkripase reverse tradisional ora bisa ngidinke suhu dhuwur (suhu optimal kanggo aktivitas MMLV yaiku 37-50 ° C, lan AMV yaiku 42-60 ° C).RNA virus sing luwih kompleks ora bisa ditranskripsi kanthi efektif dadi cDNA ing suhu sing sithik, sing nyebabake efisiensi deteksi.RT-qPCR tradisional umume mbutuhake partisipasi rong enzim kunci (transkripase terbalik lan polimerase DNA), sing ndadekake ora bisa nyederhanakake operasi sistem reaksi lan nyuda biaya.Ing kene kita bakal ngenalake rong transkripase mbalikke tahan suhu dhuwur, TtH lan RevTaq.Enzim loro iki uga nduweni fungsi DNA polimerase, mula diarani enzim bifungsi.

TtH DNA polimerase

Sampeyan mesthi wis krungu babagan TtH, sing asale saka bakteri termofilik Thermus thermophilus HB8.Ing ngarsane kation divalen kayata Mg2+, nduweni aktivitas DNA polimerase.Iki digunakake kanthi wiyar ing reaksi PCR kaya enzim Taq, nanging nduweni resistensi panas sing luwih dhuwur tinimbang enzim Taq, saengga uga nduweni efek sing luwih apik ing PCR kanthi template isi GC sing dhuwur.

· Enzim iki dhasaré ora duwé aktivitas eksonuklease 3′→5′ lan aktivitas eksonuklease 5′→3′, saéngga bisa uga dipigunakaké kanggo urutan dideoksi.

Enzim iki nduweni aktivitas RTase.Ing ngarsane Mn2+, aktivitas RTase bakal ditingkatake.Nggunakake fitur iki, bisa digunakake kanggo nindakake reaksi transkripsi mbalikke lan reaksi PCR ing tabung sing padha, yaiku, siji-langkah RT-PCR.Nanging, ing ngarsane Mn2 +, akurasi RT-PCR ora dhuwur.Kegiatan RT ora ana hubungane karo kegiatan rnaase H.

· Peningkatan aktivitas polimerase Tth-DNA (pH9, optimal +55 ℃～ + 70 ℃, maksimal +95 ℃) ngatasi masalah sing disebabake dening struktur sekunder RNA.CDNA sing diasilake bisa diamplifikasi dening PCR kanthi enzim sing padha ing ngarsane ion Mg2+.

· Kemampuan polimerase Tth-DNA kanggo nindakake transkripsi terbalik lan amplifikasi DNA ing suhu dhuwur ndadekake enzim iki migunani kanggo analisis kuantitatif RT-PCR, kloning, lan ekspresi gen saka RNA seluler lan virus.
· Tth-DNA polymerase digunakake kanggo RT-PCR kanggo nggedhekake RNA nganti 1kb.

Fitur lan kaluwihan

Tth DNA polimerase:

• Priksa ukuran produk polymerase chain reaction (PCR) sing dioptimalake, paling ora 1000 bp ing reaksi RT-PCR

• Nampa deoxyribonucleoside triphosphate sing diowahi minangka substrat

• Ora ana hubungane karo kegiatan RNase H

• Nduwe stabilitas termal sing dhuwur kanggo ngatasi masalah, biasane ana hubungane karo struktur sekunder sing ana ing RNA

RevTaq RT-PCR DNA polimerase

Polimerase DNA tahan panas kanthi aktivitas reverse transcriptase

RevTaq-RT-PCR-DNA polymerase minangka enzim sing direkayasa, tahan panas banget, fungsi ganda kanthi transkripase terbalik lan aktivitas polimerase DNA sing dipikolehi liwat evolusi langsung lan buatan.

· Setengah umur RevTaq RT-PCR DNA polimerase ing 95°C luwih saka 40 menit.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ngidini transkripsi mbalikke suhu dhuwur langsung saka cithakan RNA, lan langkah transkripsi mbalikke bisa diulang kaping pirang-pirang kanggo ngasilake cithakan cDNA liyane.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ngidini "nol-langkah" RT-PCR (ora ana langkah transkripsi mundur isotermal), amarga ing langkah ekstensi PCR siklik, transkripsi terbalik lan amplifikasi DNA dumadi bebarengan.Iki uga ningkatake reaksi transkripsi mbalikke ing suhu dhuwur, saéngga bisa nyuda masalah nalika leleh struktur sekunder sing kuwat ing RNA ing suhu dhuwur.

· Amarga rumus wiwitan panas adhedhasar aptamer, polimerase DNA RevTaq RT-PCR bakal ngasilake asil sing luwih apik nalika suhu anil lan extension luwih dhuwur tinimbang 57°C.

· Wiwit enzim tahan panas, dianjurake kanggo ngrancang primer lan probe kanthi titik leleh sing dhuwur banget (>60°C).

· Disaranake kanggo ngoptimalake suhu langkah annealing / extension liwat gradien suhu sajrone proses persiyapan reaksi.

· Sing luwih dhuwur suhu, sing luwih spesifik saka PCR.Siklus transkripsi mbalikke biasane ditindakake ing suhu sing luwih dhuwur tinimbang siklus PCR, amarga hibridisasi Cithakan Primer DNA: RNA biasane nduweni titik leleh sing luwih dhuwur tinimbang dupleks Cithakan Primer DNA: cDNA.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase direkayasa sacara genetis lan dioptimalake, lan ukuran amplicon antara 60-300 bp.

RevTaq RT-PCR DNA polimerase wates deteksi tekan 4 salinan/

Sistem reaksi sing dioptimalake (panyiapan primer titik leleh dhuwur) ditampilake ing gambar kasebut.RevTaq RT-PCR DNA polimerase-mimpin RT-PCR nuduhake sensitivitas luwih saka TaqPath 1-langkah RT-qPCR master mix, lan deteksi ngisor Sample dilution gradient.

Kaluwihan liyane:

Fungsi wiwitan cepet → Langkah denaturasi termal wiwitan bisa dilewati.

Formula aptamer wiwitan panas → Nyedhiyakake aktivitas enzim 100% langsung lan nyegah amplifikasi non-spesifik ing suhu sing kurang (<57°C).

Fungsi pembelahan → Langkah ekstraksi RNA diilangi, amarga RevTaq RT-PCR DNA polimerase uga bisa ngolah sampel reaksi kasar.Bisa langsung numpes membran sel eukariota, bakteri lan virus ing siklus RT-PCR panas.

Tingkat bahan mentah IVD → standar kualitas dhuwur lan rega sing kompetitif