Tips kanggo Ngapikake Recovery lim

1. Tambah beban sampel sajrone elektroforesis.

2. Gunakake buffer elektroforesis sing anyar disiapake.

3. Nalika nglereni lim, nyoba kanggo Cut mung lim karo ngudani kanggo ngurangi volume nglereni lim: ora perlu lim karo sawetara pecahan waé, digunakake bakal mengaruhi tingkat Recovery.

4. Sawise nyawiji loro utawa luwih bêsik lim, nggunakake tabung ora ketompo carane gedhe volume lan transfer menyang kolom padha.

5. Solusi sing ditambahake ing sol bisa dadi luwih sithik, sing luwih kondusif kanggo ngiket DNA menyang membran, nanging umume ora ngluwihi 750ul.

6. Kunci pemulihan gel yaiku ngiket DNA menyang kolom liwat konsentrasi uyah, keasaman (muatan) lan hidrofobik solusi ing kolom.Mulane, yen pH buffer elektroforesis dhuwur banget, 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) bisa ditambahake menyang sol;supaya luwih nyegat molekul DNA ing membran, 30% isopropanol bisa ditambahake kanggo panas menyang Cairan sawise dissolving lem.

7. Sadurunge nambahake eluen, ninggalake kolom ing suhu kamar kanggo sawetara menit (kira-kira 10 menit) kanggo nguapake etanol kanthi lengkap.

8. Akhire, nambah kurang eluent kanggo nyilikake volume Recovery.Umumé, 30-50μl eluent digunakake kanggo elusi (ora sethithik banget, yen ora, ora bakal bisa udan membran, sing ora kondusif kanggo elusi);tetesan elusi ana ing tengah membran, kanggo ngrampungake DNA sing kaiket ing membran.

9. Sawise nambah eluent, bisa eluted ing adus banyu saka 55 derajat kanggo 5 menit utawa diselehake ing adus banyu saka 50 derajat kanggo luwih saka 10 menit, utawa disegel karo parafilm ing 4 derajat sewengi, lan banjur centrifuged kanggo Recovery dina sabanjuré, efek apik.

10. Tambah eluate centrifuged bali menyang kolom adsorption lan centrifuge maneh.

Cara lan prosedur sing rinci kanggo pemulihan produk PCR

1. Daur ulang karet biasa

Yen sampeyan pengin mbalekake lem, luwih becik nggunakake kit, sing trep lan nduweni tingkat pemulihan sing rada dhuwur.Yen pancene kudu mbalekake kanthi manual, sampeyan bisa nambah 3 kaping volume TE sawise nglereni lim.Sawise leleh ing adus banyu, fenol, fenol/kloroform diekstraksi kanthi resik, lan etanol diendhani.Mekaten.

2. Recovery DNA saka gel titik leleh kurang

Pemurnian Fragmen DNA Tambah TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) padha karo volume gel, lan sijine ing adus banyu 65 ° C kanggo 5 menit kanggo dissolve gel rampung.

Sawise digawa menyang suhu kamar, jumlah fenol sing padha (jenuh karo TE, TE disegel ing lapisan ndhuwur, lan lapisan ngisor fenol dicopot) ditambahake, lan campuran dicampur alon-alon (ora perlu dicampur), lan disentrifugasi ing 12.000 rpm suwene 3 menit.Baleni 1-2 kaping.

Njupuk supernatant, nambah 0,1 volume 3mol/L natrium asetat (pH 5,2) lan 2,5 kaping volume etanol absolut kanggo nindakake presipitasi etanol.Bubarake DNA sing diresiki kanthi jumlah TE sing cocog, ukur isi, lan nyiapake kanggo digunakake (bisa digunakake kanggo analisis struktur gen target, persiapan probe, lsp.).

3. Recovery PCR karo specificity amplifikasi apik

Yen spesifisitas amplifikasi PCR apik, mung pemurnian lan pemulihan produk PCR sing gampang.Sampeyan bisa nambah 50ug/ml proteinase K kanggo produk PCR, 37 derajat kanggo 1h, extract sapisan karo fenol/chloroform, extract sapisan karo kloroform, lan nambah 0,1 volume saka supernatant.Natrium asetat ditemokake kanthi presipitasi kanthi 2,5 volume etanol absolut.

produk sing gegandhengan:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/