Cara PCR lan kontaminasi aerosol asam nukleat ing laboratorium pengujian asam nukleat kaya rong sisi koin.Kita mung bisa milih duwe utawa ora, nanging kita ora bisa milih arep utawa mbuwang.

1. Screening saka DNA remover

Kanggo mbusak spasial saka kontaminasi aerosol asam nukleat, pisanan perlu kanggo screening metu DNA removers sing bisa mbusak asam nukleat ing negara Cairan.Amarga ora akeh penghapus DNA sing bener-bener bisa.Kanggo metode eksperimen, waca: Penghapus DNA ora bisa dadi "sudut rahasia" laboratorium!

Ing eksperimen iki, 100 salinan / μL (CT kira-kira 31) saka plasmid ASFV lan penghapus DNA sing diukur nganggo PCR digital dicampur kanthi volume sing padha, lan banjur bereaksi ing suhu kamar suwene 10 menit, 20 menit lan 30 menit.Sawise ekstraksi asam nukleat, amplifikasi qPCR ditindakake.Kontrol positif sing dicampur karo plasmid lan banyu dibandhingake.Wiwit eksperimen ora rampung ing wektu sing padha, bisa uga ana panyimpangan tartamtu ing antarane asil, nanging ora mengaruhi kesimpulan eksperimen.Nganti saiki, aku wis ngevaluasi 10 produk penghapus DNA komersial.Mung produk No. 1, No. 6 lan No. 8 kanthi efektif ngrusak DNA plasmid ing kahanan cair.Produk liyane meh ora ana pengaruhe.

Tabel 1 Efek penghapusan asam nukleat saka penghapus DNA sing kasedhiya kanthi komersial

2. Eksperimen efek penghapusan DNA saka disinfektan sing umum digunakake

1. Screening disinfektan sing umum digunakake

Ana macem-macem jinis disinfektan sing umum digunakake ing laboratorium: aldehida, fenol, alkohol, uyah amonium kuartener, peroksida, preparat klorin, lan asam lan basa.Efek disinfeksi saka disinfektan kasebut marang mikroorganisme wis diverifikasi kanthi lengkap dening eksperimen, nanging ora ana data eksperimen sing cukup babagan efek degradasi asam nukleat.Laboratorium uji asam nukleat mbutuhake disinfektan sing ora mung duwe efek disinfeksi sing apik ing mikroorganisme, nanging uga bisa ngrusak DNA.Asil tes nuduhake yen mung loro persiapan klorin saka 84 disinfektan lan asam trichloroisocyanuric lan 1 M asam klorida sing memenuhi syarat.Amarga asam hidroklorat 1 M banget korosif, disaranake preparat klorin digunakake minangka pembuangan sampah ing laboratorium uji asam nukleat.Nanging, persiapan klorin korosif kanggo logam lan ora bisa digunakake kanggo disinfeksi instrumen lan peralatan.

Tabel 2 Efek penghapusan DNA saka macem-macem jinis disinfektan

2. Konsentrasi efektif minimal saka persiapan klorin

Disinfektan adhedhasar klorin duweni efek degradasi DNA sing kuwat, nanging amarga korosif lan iritasi logam, bisa digunakake kanggo ngresiki lantai, countertop non-logam, tips rendaman, tabung centrifuge lan item tes liyane.

Miturut "Pedoman Teknis Disinfeksi Epidemik Pneumonia Koroner Anyar": Polutan (getih, sekresi lan muntah pasien) kasedhiya klorin 5g/L-10g/L disinfektan sing ngandhut klorin;jubin, tembok, lan lumahing obyek nggunakake klorin kasedhiya 1g/L Disinfektan klorin: sandhangan, sprei lan tekstil pisanan direndhem ing disinfektan klorin karo 0,5g/L klorin kasedhiya kanggo 30 menit, lan banjur di resiki kaya biasane.

Tabel 3 Efek penghapusan DNA saka macem-macem konsentrasi disinfektan klorin

Asil tes nuduhake yen: yen konsentrasi klorin efektif luwih saka utawa padha karo 1.2 g/L, disinfektan sing ngandhut klorin bisa ngrusak 100 salinan/μL plasmid nalika digunakake sajrone 5 menit.Nalika tumindak sajrone 10 menit, 84 disinfektan kanthi konsentrasi klorin efektif luwih gedhe utawa padha karo 0,6 g / L bisa ngrusak 100 salinan / μL plasmid kanthi lengkap.

3. Eksperimen penghapusan udara sing dicemari dening aerosol asam nukleat

Carane ngresiki udhara sing dicemari dening aerosol asam nukleat?Umume pikirane yaiku nggawe lingkungan sing kontaminasi aerosol lan banjur ngresiki, utawa ngresiki asam nukleat sawise kontaminasi.Kanggo kula, eksperimen sing ora bisa diulang lan asil eksperimen ora bisa dianalisis kanthi kuantitatif ora ana gunane, mula aku nyilih sawetara metode disinfeksi udara disinfektan.Deleng "GB27948-2020 Persyaratan Umum kanggo Disinfektan Udara" lan "Spesifikasi Teknis Disinfeksi"

1. Materi tes

1.1 Penghapus DNA: Ing eksperimen iki, loro penghapus DNA sing kasedhiya kanthi komersial 6 lan 8 ing Tabel 1 dipilih.

1.2 Tes plasmid: Ngelingi yen nilai CT saka polusi laboratorium paling akeh bakal luwih dhuwur tinimbang 30, konsentrasi plasmid gen ASFV sing digunakake wektu iki kira-kira 100 salinan / μL, lan CT PCR kuantitatif fluoresensi kira-kira 31,07.Tambah plasmid menyang swab kapas kumpul lan garing.

1.3 Instrumen tes: Instrumen disinfeksi Bilingkehan KVBOX, sing didhukung kanthi apik dening Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., nduweni kinerja disinfeksi udara sing apik karo disinfektan hidrogen peroksida, lan bisa mateni spora lan mikroorganisme liyane kanthi efektif.

1.4 Ruang tes: jendela transfer sing ditutup kira-kira 0,1 meter kubik.

2. Metode tes

Jumlah set disinfektan ing mesin disinfeksi yaiku 10ml, lan konsentrasi 100ml / m3, sing luwih dhuwur tinimbang "GB27948-2020 Keperluan Umum kanggo Disinfektan Udara": nalika nggunakake disinfeksi semprotan aerosol, jumlah disinfektan kudu ≤10 ml / m3