Bubar, aku nemokake sing apik tenan!Akeh profesional eksperimen majeng ing saubengé malah ora ngerti sawetara poin kawruh eksperimen sing dhasar banget.

Contone, apa sampeyan bisa mangsuli pitakon-pitakon ing ngisor iki?

Apa ana prabédan antarane OD260 lan A260?Apa tegese saben?
OD punika singkatan saka Kapadhetan optik (optical density), A iku singkatan saka absorbance (absorbance), loro konsep sing bener padha, "optical density" punika "absorbance", nanging "optical density" ing baris karo paling standar nasional lan luwih standar.

Biasane kita ngukur nilai OD ing 260nm kanggo ngetung konsentrasi asam nukleat, dadi apa sing diwakili 1OD?
Asam nukleat nduweni puncak panyerepan maksimal kanthi dawa gelombang 260nm, sing ngemot DNA lan RNA, uga fragmen asam nukleat sing pecah (iki minangka titik utama).
Nilai OD sing diukur ing dawa gelombang 260 nm dicathet minangka OD260.Yen sampel murni, nilai OD260 bisa ngetung konsentrasi sampel asam nukleat.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (DNA untai ganda)
= 37 μg/ml ssDNA (DNA untai tunggal)
= 40 μg/ml RNA
= 30 μg/ml dNTPs (oligonukleotida)
Apa ana sambungan lan prabédan antarane RT-PCR, Realtime-PCR lan QPCR?
RT-PCR singkatan saka Reverse Transcription PCR
Real Time PCR = qPCR, singkatan saka Quantitative Real Time PCR
Senajan PCR Wektu Nyata (PCR kuantitatif fluoresen wektu nyata) lan PCR Transkripsi Reverse (PCR transkripsi terbalik) loro-lorone katon disingkat RT-PCR.Nanging konvensi internasional yaiku: RT-PCR khusus nuduhake PCR transkripsi terbalik.

Apa nt, bp, lan kb sing umum digunakake kanggo njlèntrèhaké dawa DNA/RNA ing biologi?
nt = nukleotida
bp = pasangan basa pasangan basa
kb = kilobase

Mesthi, sampeyan bakal ujar manawa akeh wong sing ora peduli karo rincian cilik kasebut!Saben uwong nindakake iki, lan ora ana sing bakal takon apa iku.Sampeyan ngerti iki ora perlu, ta?

Ora, Ora, Ora, iku perlu banget kanggo ngerti iki!amarga saka kang?
Amarga sampeyan pengin ngirim artikel!sedulur!Apa sampeyan arep lulus utawa nggayuh prestasi riset ilmiah, sampeyan kudu ngandelake artikel kanggo ngomong!

Ekstraksi asam nukleat kudu dadi eksperimen sing paling gampang lan paling dhasar.Kualitas ekstraksi asam nukleat langsung nemtokake asil eksperimen sakteruse.

Sanadyan wis bola-bali dakkandhakake, nanging isih akeh kanca-kanca sing ora perduli.Wektu iki aku mutusake kanggo metu saka artikel!

Informasi Minimal kanggo Publikasi Eksperimen PCR Wektu Nyata Kuantitatif, diarani MIQE, minangka set pedoman eksperimen kuantitatif fluoresensi sing diluncurake sacara internasional, sing ngusulake standar minimal kanggo informasi eksperimen sing dibutuhake kanggo ngevaluasi eksperimen PCR kuantitatif fluoresensi lan nerbitake artikel.Liwat kahanan eksperimen lan metode analisis sing diwenehake dening eksperimen, pamawas luwih bisa ngevaluasi keabsahan skema eksperimen kasebut.

Bisa dideleng manawa ing bagean ekstraksi asam nukleat, item deteksi ing ngisor iki wis diusulake,

"E" nuduhake informasi sing kudu diwenehake lan "D" nuduhake informasi sing kudu diwenehake yen perlu.

Wangun kasebut rumit banget, nyatane, aku pengin ujar manawa saben wong kudu diwiwiti

kemurnian (D), ngasilake (D), integritas (E) lan konsistensi (E) kanggo ngevaluasi asam Nukleat ing papat aspek kasebut.

Miturut kabiasaan eksperimen, pisanan ngomong babagan cara evaluasi kemurnian lan konsentrasi.

Pangukuran OD minangka cara deteksi favorit lan paling gampang kanggo para eksperimen.Kanggo prinsip, aku ora bakal njlèntrèhaké rincian ing kene.Akeh laboratorium saiki nggunakake spektrofotometer ultra-mikro kanggo nganalisis sampel asam nukleat sacara kuantitatif.Nalika nampilake nilai absorbansi, program kasebut langsung menehi nilai konsentrasi (asam nukleat, protein lan pewarna fluoresensi) lan rasio sing gegandhengan.Minangka kanggo analisis Nilai OD, Simpen gambar iki lan sampeyan bakal nggoleki.

Dhaptar solusi nilai OD universal

Nanging, ana sawetara caveats sing kudu digawa metu dhewe kanggo sampeyan.

(Sawise kabeh, aku ngerti sampeyan mesthine sing nyimpen lan ngenteni nganti sampeyan butuh!)

Cathetan 1 Peralatan

Nilai OD bakal kena pengaruh peralatan sing beda.Anggere OD260 ana ing sawetara tartamtu, nilai OD230 lan OD280 migunani.Contone, sawetara panyerepan saka Eppendorf D30 umum ing 260nm yaiku 0 ~ 3A, lan NanoDrop One of Thermo ing 260nm.Ing sawetara absorbance saka 0.5 ~ 62.5A.

Cathetan 2Reagen pengenceran

Nilai OD bisa dipengaruhi dening pengenceran reagen sing beda.Contone, maca OD260/280 saka RNA diresiki ing pH7,5 10mM Trisbuffer antarane 1.9-2.1, nalika ingsolusi banyu netralrasio bakal luwih murah, Mungkin mung 1,8-2,0, nanging iki ora ateges sing kualitas RNA owah-owahan Bèntenipun.

Cathetan 3Sisa zat

Anane zat sisa bakal mengaruhi akurasi pangukuran konsentrasi asam nukleat, mula perlu kanggo nyegah residu protein, fenol, polisakarida lan polifenol ing conto asam nukleat.

Nanging, nyatane, ekstraksi nganggo reagen organik minangka cara lawas.Ing kit komersial, efek ekstraksi bisa digayuh liwat kolom adsorpsi basis silika sing digabungake karo sentrifugasi, ngindhari reagen organik beracun lan mbebayani sing angel dibusak, lan liya-liyane.Kit ekstraksi asam nukleat Foregene, ora nggunakake DNase / RNase lan reagen organik beracun sajrone operasi, cepet lan aman, karoefek ikuapik(sengaja ngomong yen iku gundul, nanging aku ngerti sampeyan pengin ngerti).

Conto 1: Ekstraksi DNA genom ngasilake lan kemurnian

Kit Isolasi DNA Foregene Soil (DE-05511) nambani conto lemah saka macem-macem sumber, lan jumlah lan kemurnian DNA genom sing dipikolehi ditampilake ing tabel ing ngisor iki:
Conto 2: Hasil ekstraksi RNA jaringan lan kemurnian

Kit Isolasi RNA Total Kewan (RE-03012) ngolah macem-macem conto jaringan, lan jumlah lan kemurnian RNA sing dipikolehi ditampilake ing tabel ing ngisor iki (kanggo jaringan tikus):
Nanging, aja mikir yen sampeyan wis rampung karo nilai OD.Apa sampeyan kudu ngurus poin-poin penting sing dakgambar kanggo sampeyan ing ngarep?

Kabar

Molekul asam nukleat pecahan uga bakal diitung ing absorbansi.Yen sampeyan duwe residu DNA genomik ing RNA, nilai OD sampeyan bakal katon dhuwur banget, nanging konsentrasi RNA sing nyata ora bisa ditemtokake.Apa RNA sampeyan Ora jelas yen ana degradasi, mula kita isih butuh cara evaluasi sing komprehensif kanggo menehi keputusan sing luwih akurat, yaiku, evaluasi integritas asam nukleat sing kasebut ing MIQE.