timbal

RNA non-coding dawa, lncRNA minangka RNA non-coding kanthi dawa luwih saka 200 nukleotida, umume antara 200-100000 nt.lncRNA ngatur ekspresi gen ing tingkat epigenetik, transkripsi lan post-transkripsi, lan melu ing silencing kromosom X, imprinting genom lan modifikasi kromatin, aktivasi transkripsi, interferensi transkripsi, transportasi nuklir, regulasi siklus sel, regulasi diferensiasi sel, lan efek kompensasi dosis (Dosis lan efek kompensasi sing gegandhengan karo pangembangan manungsa) , lan saiki dadi salah sawijining titik panas ing bidang biomedis.

01  Jinis lan karakteristik LncRNA

lncRNA dipérang dadi pirang-pirang jinis miturut macem-macem sumber pambentukan, kaya sing dituduhake ing gambar ing ndhuwur.Nduweni ciri ing ngisor iki:

1. lncRNA biasane luwih dawa, kanthi ekspresi dinamis lan cara splicing sing beda sajrone diferensiasi
2. Dibandhingake karo gen coding, lncRNA biasane duwe tingkat ekspresi sing luwih murah
3. Umume lncRNA duwe spesifisitas ekspresi temporal lan spasial sing jelas ing proses diferensiasi lan pangembangan jaringan
4. Ana ekspresi karakteristik ing tumor lan penyakit liyane
5. Lokasi subselular lncRNA maneka warna
6. Urutane kurang ing konservasi, nanging fungsi kasebut nduweni tingkat konservasi tartamtu, lsp.

02 Pitakonan sing Sering Ditakoni babagan LncRNA Reverse Transcription

Amarga isi lncRNA sing kurang ing sel, dawa dawa lan struktur tingkat dhuwur, RNA kasebut asring duwe struktur kompleks kayata puteran batang utawa jepit rambut, lan RT-qPCR rentan kanggo masalah transkripsi mundur sing ora sukses utawa efisiensi sing sithik.

03 Solusi transkripsi terbalik LncRNA

Ing aturan pusat, proses virus RNA nggunakake transkripase terbalik dhewe kanggo sintesis DNA nggunakake RNA minangka cithakan diarani transkripsi terbalik.Proses nggunakake RNA virus reverse transcriptase kanggo nyintesis cithakan cDNA in vitro diarani reverse transcription.Unsur utama kalebu ing sistem transkripsi mbalikke: cithakan RNA, reverse transcriptase, primer lan komponen liyane.

1. Cithakan RNA

Pengaruh cithakan RNA ing transkripsi mbalikke dibayangke ing struktur, kemurnian lan integritas.Sing luwih dhuwur kemurnian lan integritas RNA sing diekstrak, luwih dhuwur efisiensi transkripsi mbalikke lan luwih akurat asil kuantitatif sabanjure.RNA sing diresiki dening reagen ekstraksi RNA sing umum digunakake asring ngemot residu alkohol lan uyah guanidine, sing nduweni efek inhibisi sing kuat ing sebagian besar transkripase terbalik.

2. Reverse transcriptase

Reverse transcriptase nduwe pengaruh utama ing kabeh sistem transkripsi mbalikke.Suhu sing cocog kanggo reverse transcriptase sing digunakake ing pirang-pirang laboratorium umume 42°C.Nyatane, bukaan struktur RNA tingkat dhuwur mbutuhake suhu sing luwih dhuwur, lan syarat kanggo transkripase terbalik luwih dhuwur.

3.Primer

Primer transkripsi terbalik kalebu primer spesifik gen, primer acak lan primer Oligo dT.Umume lncRNA ora ngemot buntut polyA, lan penting kanggo cocog karo primer acak karo Oligo dT.

4. Komponen liyane

Amarga kasunyatan manawa RNA gampang banget dirusak, introduksi komponen ing sistem transkripsi terbalik bisa diminimalisir, sing bisa nyegah entri RNase kanthi efektif lan njamin kelancaran transkripsi terbalik.

Foregeneentuk saka cithakan RNA, transkripsi mbalikke menyang qPCR

Kawal deteksi lncRNA sampeyan kanthi lengkap

RNA Total Hewan IsolasiKit (karo kolom penghapusan gDNA)

RNA total sel IsolasiKit (karo kolom penghapusan gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(Kanthi gDNase)(Super Premix kanggo sintesis cDNA untai pertama saka lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Akaluwihan ofEkstraksi RNA:

Kit kasebut nggunakake teknologi ekstraksi RNA generasi katelu, ora perlu nggunakake DNase.

11 menit saka sel kultur piring 96, 24, 12, lan 6 sumur, ekstraksi kanthi efisiensi dhuwur saka RNA sel total tanpa gDNA, kemurnian dhuwur, lan berkualitas tinggi.

Keuntungan saka transkripsi balik lncRNA:

Sistem transkripsi terbalik sing dikembangake khusus kanggo LncRNA kanggo mbusak kontaminasi DNA genom kanthi cepet.

Sistem transkripsi mbalikke nduweni stabilitas termal sing dhuwur lan isih nduweni kinerja transkripsi terbalik sing apik ing suhu 50°C.

Cithakan kanthi isi GC dhuwur lan struktur sekunder sing kompleks bisa dibalik kanthi efisiensi dhuwur.

Kaluwihanof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase nduweni efisiensi amplifikasi sing luwih dhuwur, sensitivitas amplifikasi sing luwih dhuwur, lan spesifisitas amplifikasi sing luwih dhuwur

Campuran Gampang PCR Nyata sing dioptimalake ndadekake SYBR Green aku duwe sensitivitas deteksi sing luwih dhuwur, lan intensitas fluoresensi 3-5 kaping saka produk sing padha, sing bisa nyukupi kabutuhan macem-macem eksperimen kuantitatif fluoresensi.