Hearing loss (HL) minangka penyakit cacat sensori sing paling umum ing manungsa.Ing negara maju, kira-kira 80% kasus budheg prelingual ing bocah-bocah disebabake faktor genetik.Sing paling umum yaiku cacat gen tunggal (kaya sing ditampilake ing Gambar 1), mutasi gen 124 ditemokake ana hubungane karo gangguan pendengaran nonsyndromic ing manungsa, liyane disebabake faktor lingkungan.Implan koklea (alat elektronik sing diselehake ing kuping utama sing nyedhiyakake stimulasi listrik langsung menyang syaraf pendengaran) minangka pilihan sing paling efektif kanggo ngobati HL sing abot, dene alat bantu dengar (alat elektronik eksternal sing ngowahi lan nggedhekake gelombang swara) bisa mbantu Pasien kanthi HL moderat.Nanging, saiki ora ana obat sing kasedhiya kanggo nambani HL (GHL).Ing taun-taun pungkasan, terapi gen wis entuk perhatian sing luwih akeh minangka pendekatan sing janji kanggo ngobati disfungsi kuping njero.

Gambar 1.Distribusi jinis variasi sing ana gandhengane karo budheg.[1]

Bubar, ilmuwan saka Institut Salk lan Universitas Sheffield nerbitake asil riset ing Molecular Therapy - Methods & Clinical Development [2], sing nuduhake prospek aplikasi sing wiyar kanggo terapi gen in vivo saka budheg turun temurun.Uri Manor, asisten profesor riset ing Institut Salk lan direktur Waitt Center for Advanced Biophotonics, ujar manawa dheweke lair kanthi gangguan pangrungu sing abot lan rumangsa yen mulihake pendengaran bakal dadi hadiah sing apik.Panliten sadurunge nemokake yen Eps8 minangka protein regulasi aktin kanthi aktivitas naleni lan capping aktin;ing sel rambut koklea, kompleks protein sing dibentuk dening Eps8 kanthi MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 lan GNAI3 utamane ana ing paling Tip saka stereocilia dawa, sing bebarengan karo MYO15A lokalisasi BAIAP2L2 ing tip stereocilia sing luwih cendhek, dibutuhake kanggo njaga bundel rambut.Mulane, Eps8 bisa ngatur dawa stereocilia sel rambut, sing penting kanggo fungsi pangrungu normal;Pambusakan utawa mutasi Eps8 bakal nyebabake stereocilia sing cendhak, sing ndadekake ora bisa ngowahi swara dadi sinyal listrik kanthi bener kanggo persepsi otak, sing banjur nyebabake budheg..Ing wektu sing padha, kolaborator Walter Marcotti, profesor ing Universitas Sheffield, nemokake yen sel rambut ora bisa berkembang kanthi normal yen ora ana Eps8.Ing panliten iki, Manor lan Marcotti kerja sama kanggo neliti manawa nambahake Eps8 menyang sel stereociliary bisa mulihake fungsine lan, kanthi mangkono, ningkatake pangrungu ing tikus.Tim panaliti nggunakake vektor virus adeno-associated (AAV) Anc80L65 kanggo ngirim urutan kode sing ngemot EPS8 jinis liar menyang koklea tikus Eps8-/- bayi P1-P2 kanthi injeksi membran jendhela bunder;ing sel rambut koklea tikus Fungsi stereocilia didandani sadurunge diwasa;lan efek ndandani ditondoi dening teknologi imaging lan pangukuran stereocilia.Asil nuduhake yen Eps8 nambah dawa stereocilia lan mulihake fungsi sel rambut ing sel frekuensi rendah.Dheweke uga nemokake manawa, suwene suwe, sel kasebut katon ilang kemampuan kanggo ditulungi dening terapi gen iki.Implikasi kasebut yaiku yen perawatan iki kudu ditindakake ing utero, amarga sel rambut Eps8-/- bisa uga wis diwasa utawa akumulasi karusakan sing ora bisa didandani sawise tikus lair."Eps8 minangka protein kanthi macem-macem fungsi, lan isih akeh sing kudu dijelajahi," ujare Manor.Panaliten ing mangsa ngarep bakal kalebu nyelidiki efek terapi gen Eps8 kanggo mulihake pangrungu ing tahap pangembangan sing beda-beda, lan apa bisa nambah kesempatan perawatan.Kebetulan, ing November 2020, Profesor KarenB Avraham saka Universitas Tel Aviv ing Israel nerbitake asile ing jurnal EMBO Molecular Medicine [3], nggunakake teknologi terapi gen sing inovatif kanggo nggawe virus AAV9-PHP sing ana gandhengane karo adeno sintetik sing ora mbebayani.B, Cacat gen ing sel rambute tikus Syne4-/- didandani kanthi nyuntikake virus sing nggawa urutan pengkodean Syne4 menyang kuping njero tikus, saéngga bisa mlebu ing sel rambut lan ngeculake materi genetik sing digawa, saéngga bisa diwasa lan bisa mlaku kanthi normal (kaya ing Gambar 2).

Gambar 2.Perwakilan skematis anatomi kuping njero, kanthi fokus ing organ Corti lan fungsi seluler nesprin-4.

Bisa dideleng yen panggunaan terapi gen kanggo nggayuh tujuan ngobati penyakit turun temurun ing tingkat gen kanthi nglebokake, ngilangi utawa mbenerake gen sing mutasi kanggo perawatan (yaiku, ngontrol owah-owahan genetik ing penyakit kasebut) duweni efek klinis sing dhuwur.prospek aplikasi.Cara terapi gen saiki kanggo budheg sing cacat genetis bisa dipérang dadi kategori ing ngisor iki:

panggantos gen

Panggantos gen bisa dibantah minangka wangun terapi gen sing paling "langsung", adhedhasar ngenali lan ngganti gen sing cacat karo salinan gen sing normal utawa liar.Sinau terapi gen kuping njero pisanan sing sukses kanggo gangguan pendengaran sing disebabake dening pambusakan gen transporter glutamat vesikular 3 (VGLUT3);AAV1-mediated pangiriman overexpression VGLUT3 eksogen ing sel rambut kuping njero (IHCs) Bisa nyebabake pemulihan pendengaran sing terus-terusan, pemulihan morfologi sinaptik pita parsial, lan respon konvulsif [4].Nanging, ing conto kalebu loro panggantos gen AAV-dikirimaké diterangake ing introduksi ndhuwur, iku penting kanggo Wigati sing model mouse digunakake kanggo jinis tartamtu saka gen pambusakan kelainan pangrungon turun temurun beda temporal saka manungsa, lan ing P1 clurut , kuping utama ing tataran diwasa pembangunan.Ing kontras, manungsa lair kanthi kuping batin sing diwasa.Bentenane iki nyegah aplikasi asil mouse kanggo perawatan kelainan budheg turun temurun manungsa kajaba terapi gen dikirim menyang kuping tikus sing diwasa.

Suntingan Gene: CRISPR/Cas9

Dibandhingake karo "pengganti gen", pangembangan teknologi panyuntingan gen wis nggawa esuke ngobati penyakit genetis saka oyod.Sing penting, metode panyuntingan gen nggawe kekurangan metode terapi gen overexpression tradisional sing ora cocog kanggo penyakit tuli turun temurun sing dominan, lan masalah yen metode overexpression ora tahan suwe.Sawise peneliti Cina khusus ngalahake alel mutan Myo6C442Y ing tikus Myo6WT / C442Y nggunakake sistem panyuntingan gen AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2, lan sajrone 5 wulan kalah, tikus Fungsi pendengaran model kasebut dibalekake;ing wektu sing padha, uga diamati yen tingkat kelangsungan hidup sel rambut ing kuping njero saya apik, wangun silia dadi biasa, lan indikator elektrofisiologis didandani [5].Iki minangka studi pisanan ing donya sing nggunakake teknologi CRISPR / Cas9 kanggo perawatan budheg turun temurun sing disebabake dening mutasi gen Myo6, lan minangka kemajuan riset penting teknologi editing gen kanggo perawatan budheg turun temurun.Terjemahan klinis perawatan nyedhiyakake basis ilmiah sing padhet.

Cara pangiriman terapi gen

Supaya terapi gen bisa sukses, molekul DNA wuda ora bisa nembus sel kanthi efektif amarga hidrofilik lan muatan negatif saka gugus fosfat, lan kanggo njamin integritas molekul asam nukleat sing ditambahake, cara sing aman lan efektif kudu dipilih.DNA sing ditambah dikirim menyang sel utawa jaringan target.AAV akeh digunakake minangka kendaraan pangiriman kanggo perawatan penyakit amarga efek infèksius sing dhuwur, immunogenicity kurang, lan tropisme jembar kanggo macem-macem jinis jaringan.Saiki, akeh karya riset nemtokake tropisme saka macem-macem subtipe AAV relatif marang macem-macem jinis sel ing koklea tikus.Nggunakake karakteristik pangiriman AAV sing digabungake karo promotor khusus sel bisa entuk ekspresi spesifik sel, sing bisa nyuda efek sing ora target.Kajaba iku, minangka alternatif kanggo vektor AAV tradisional, vektor AAV sintetik anyar terus dikembangake lan nuduhake kemampuan transduksi sing unggul ing kuping njero, sing paling akeh digunakake yaiku AAV2 / Anc80L65.Cara pangiriman non-virus bisa dipérang manèh dadi cara fisik (mikroinjeksi lan elektroporasi) lan cara kimia (basis lipid, basis polimer, lan nanopartikel emas).Loro-lorone pendekatan wis digunakake ing perawatan kelainan budheg herediter lan wis nuduhake kaluwihan lan watesan sing beda.Saliyane kendaraan pangiriman kanggo terapi gen minangka kendaraan, pendekatan sing beda kanggo administrasi gen in vivo bisa digunakake adhedhasar jinis sel target sing beda, rute administrasi, lan khasiat terapeutik.Struktur kuping njero sing rumit ndadekake angel tekan sel target lan distribusi agen panyuntingan genom alon.Labirin membranous dumunung ing labirin balung balung temporal lan kalebu duktus koklearis, duktus semisirkularis, utrikulus, lan balon.Isolasi relatif, sirkulasi limfatik minimal, lan pamisahan saka getih dening alangan labirin getih mbatesi pangiriman terapi sistemik sing efektif mung kanggo tikus neonatal.Kanggo entuk titer virus sing cocog kanggo terapi gen, injeksi lokal langsung vektor virus menyang kuping njero dibutuhake.Rute injeksi sing ditetepake kalebu [6]: (1) membran jendhela bunder (RWM), (2) trakeostomi, (3) kokleostomi endolimfatik utawa perilymphatic, (4) membran jendhela bunder ditambah fenestrasi Tube (CF) (kaya ing Fig. 3).

Gambar 3.Pangiriman kuping njero terapi gen.

Sanajan akeh kemajuan sing ditindakake ing terapi gen, adhedhasar tujuan translasi klinis, luwih akeh karya sing kudu ditindakake sadurunge terapi gen bisa dadi pilihan perawatan lini pertama kanggo pasien sing nandhang penyakit genetik, utamane ing pangembangan vektor lan metode pangiriman sing aman lan efektif.Nanging kita yakin manawa ing mangsa ngarep, jinis perawatan kasebut bakal dadi terapi khusus lan bakal duwe pengaruh sing positif banget kanggo urip wong sing duwe kelainan genetik lan kulawargane.

Foregene uga wis ngluncurake kit screening throughput dhuwur kanggo gen sing ditargetake, sing cepet lan bisa nindakake transkripsi terbalik lan reaksi qPCR tanpa ekstraksi RNA.

Link Produk

Kit RT-qPCR Cell Direct—Taqman/SYBR GREEN I

Kanggo informasi produk liyane, hubungi:

overseas@foregene.com