Fitur pinunjul saka reaksi PCR yaiku kapasitas amplifikasi sing gedhe lan sensitivitas sing dhuwur banget.Kanggo nambah kinerja PCR lan efisiensi deteksi, kita setya ningkatake kapasitas amplifikasi PCR lan sensitivitas deteksi, nanging sirah ana ing proses eksperimen.Positif palsu asring kedadeyan, lan kontaminasi silang sampel utawa kontaminasi produk PCR sing cilik banget bisa nyebabake positip palsu ing eksperimen kasebut.
Lima jinis kontaminasi produk PCR
Ana akeh alasan kanggo kontaminasi PCR, sing bisa dipérang dadi kategori ing ngisor iki:
Kontaminasi spesimen utamane disebabake dening kontaminasi wadhah kanggo ngumpulake spesimen, utawa nalika spesimen diselehake, bocor metu saka wadhah amarga sealing longgar, utawa spesimen kasebut ditempelake ing njaba wadhah, sing nyebabake kontaminasi silang;Kontaminasi nyebabake kontaminasi antarane spesimen;sawetara spesimen mikroba, utamane virus, bisa nyebar nganggo aerosol utawa mbentuk aerosol, sing nyebabake kontaminasi bebarengan.
Alesan utama yaiku nalika nyiapake reagen PCR, pistol sampel, wadhah, banyu suling ganda lan solusi liyane kena kontaminasi cithakan asam nukleat PCR.
Ing laboratorium biologi molekuler lan sawetara laboratorium sing nggunakake plasmid kloning minangka kontrol positif, masalah kontaminasi plasmid kloning uga umum.Amarga isi plasmid kloning ing volume unit cukup dhuwur, lan luwih akeh alat lan reagen sing dibutuhake ing proses pemurnian, lan plasmid ing sel urip bisa kontaminasi amarga kemampuan pertumbuhan lan reproduksi sel sing kuat.
Kontaminasi produk sing digedhekake minangka masalah kontaminasi sing paling umum ing reaksi PCR.Amarga jumlah salinan produk PCR gedhe (umume 1013 salinan / ml), sing luwih dhuwur tinimbang watesan nomer salinan deteksi PCR, kontaminasi produk PCR sing cilik banget bisa nyebabake positip palsu.
Polusi aerosol minangka bentuk kontaminasi produk PCR sing paling mungkin, lan uga paling gampang diabaikan.Iki dibentuk kanthi gesekan ing antarane permukaan cair lan udhara.Umume, kontaminasi aerosol bisa dibentuk nalika tutup dibukak, nalika sampel disedot, utawa sanajan tabung reaksi digoncang kanthi kuat.Miturut petungan, partikel aerosol bisa ngemot 48.000 salinan, mula polusi sing disebabake minangka masalah sing kudu diwenehi perhatian khusus.
Utamane, laboratorium tes asring nggunakake pasangan primer sing padha kanggo nguji gen tartamtu.Sajrone wektu, akeh kontaminasi produk PCR bakal kedadeyan ing ruang laboratorium.Sawise kontaminasi kasebut kedadeyan, angel ngilangi ing wektu sing cendhak.
Kanggo telung jinis polusi pisanan, kita bisa nggunakake cara sing efektif kanggo nyegah, nanging polusi sing disebabake dening produk PCR angel dicegah, utamane ing pambangunan laboratorium PCR sing ora standar.Ing proses PCR, nalika tip pipette nyedot lan ngunekke Cairan, lan tutup tabung PCR dibukak, aerosol bakal kawangun.Molekul DNA sing digawa dening aerosol (siji aerosol bisa nggawa puluhan ewu DNA) angel diilangi amarga ngambang ing udara.Sawise babak sabanjure eksperimen PCR dienalake, positip palsu mesthi bakal kedadeyan.
Kaya sing dituduhake ing gambar ing ngisor iki, kontrol negatif uga nggedhekake band kapentingan sing cocog:
Pérangan pisanan saka masalah polusi lan pencegahan PCR iki dikenalaké ing kene.Masalah sabanjure bakal nggawa sampeyan bagean kapindho "Nyegah kontaminasi produk PCR", supaya tetep dirungokake!
wektu Post: Jul-25-2017
