PCR langsung minangka reaksi sing langsung nggunakake jaringan kewan utawa tanduran kanggo amplifikasi tanpa ekstraksi asam nukleat.Ing pirang-pirang cara, PCR langsung bisa digunakake kaya PCR biasa

Bentenane utama yaiku buffer khusus sing digunakake ing PCR langsung, sampel bisa langsung kena reaksi PCR tanpa ekstraksi asam nukleat, nanging ana syarat sing cocog kanggo toleransi enzim lan kompatibilitas buffer sing melu reaksi PCR langsung.

Sanajan ana luwih utawa kurang inhibitor PCR ing conto umum, PCR langsung isih bisa nggayuh amplifikasi sing dipercaya miturut tumindak enzim lan buffer.Reaksi PCR tradisional mbutuhake asam nukleat kualitas dhuwur minangka cithakan, kang bisa nyandhet kemajuan Gamelan reaksi PCR yen cithakan ngandhut protein lan impurities liyane.PCR langsung saiki minangka salah sawijining teknologi sing paling populer ing bidang diagnostik molekuler.

01 Direct PCR wiwitane digunakake kanggo kewan lan tanduran

Aplikasi paling awal saka PCR langsung ing lapangan kewan lan tetanduran, kayata getih, jaringan lan rambute tikus, kucing, pitik, terwelu, wedhus, sapi, lan sapiturute, godhong lan wiji tanduran, lan liya-liyane, digunakake kanggo sinau genotyping, transgenik, deteksi plasmid, analisis kalah gen, identifikasi sumber DNA, identifikasi spesies, analisis SNP.

Kothak kasebut duwe sawetara fitur umum, yaiku, isi gen target relatif dhuwur lan ekstraksi asam nukleat nyusahake, mula PCR langsung ora mung bisa ngirit wektu lan duwe pengaruh cilik ing asil, nanging uga ngirit biaya.

PCR langsung digunakake kanggo deteksi pathogen iku prakara taun anyar, sawetara manufaktur reagen PCR wis digawe akèh efforts ing arah iki nalika nggawe inovasi.Utamane ing epidemi COVID-19 iki, akeh produk deteksi kaya sing wis muncul ing pasar, kayata Kit Deteksi Asam Nukleat SARS-CoV-2 (Metode Probe Fluorescent Multiplex PCR) sing diteliti lan dikembangake dening Foregene, sing nggunakake teknologi RT PCR Real-time (rRT-PCR) kanggo deteksi kualitatif saka SARS-CoV-2, sampel asam nasropharyngeal manungsa.

Foregene minangka salah sawijining perusahaan sing nggunakake teknologi Direct PCR, kanggo deteksi ORF1ab normal, N, E, lanvarian garis keturunan asam nukleat ing sampel swab nasofaring utawa orofaringeal manungsa kayata garis keturunan SARS-CoV-2 B.1.1.7 (UK), garis keturunan B.1.351 (ZA), garis keturunan B.1.617 (IND) lan garis keturunan P.1 (BR).

02  Reagen sing dibutuhake kanggo PCR langsung

Sampel Lysate

Sampel lysate bisa diatur dhewe utawa dituku.Bentenipun ing komposisi saka macem-macem merek lysate bakal nggawe kemampuan lysing beda, banjur wektu lysing bakal rada beda.Contone, kanggo nyiapake conto jaringan kewan, 30 menit utawa lisis sewengi umume dianjurake, lan solusi lisis kanggo virus antara 3-10 menit.

Campuran master PCR

Disaranake nggunakake polimerase DNA wiwitan panas kanggo nambah amplifikasi spesifik lan nambah kemampuan amplifikasi.Inti PCR langsung yaiku polimerase sing tahan banget.

Ngilangi utawa nyandhet komponen ing sampel sing mengaruhi amplifikasi DNA

Sawise sampel diproses nganggo lysate, protein, lipid lan lebu sel liyane bakal dibebasake, zat kasebut bakal nyandhet reaksi PCR.Mulane, PCR langsung mbutuhake tambahan penghapusan utawa inhibitor sing cocog kanggo nyuda pengaruh faktor kasebut.

03  Koleksi limang titik kawruh PCR langsung

Kaping pisanan, teknologi Direct PCR minangka teknologi PCR langsung kanggo macem-macem conto biologi.Ing kondisi teknis iki, ora perlu kanggo misahake lan extract asam nukleat, langsung nggunakake sampel tissue minangka obyek, lan nambah primers gen target kanggo nindakake reaksi PCR.

Kapindho, teknologi Direct PCR ora mung teknologi amplifikasi cithakan DNA tradisional, nanging uga kalebu transkripsi transkripsi RNA PCR.

Katelu, teknologi PCR langsung ora mung langsung nindakake reaksi PCR kualitatif tumindake ing conto jaringan, nanging uga kalebu reaksi qPCR Real-Time, sing mbutuhake sistem reaksi duwe kemampuan interferensi fluoresensi anti-latar mburi sing kuwat lan fluoresensi endogen nyuda kemampuan antagonis.

Kaping papat, sampel sing ditargetake dening teknologi Direct PCR mung perlu ngeculake cithakan asam nukleat, lan ora mbusak protein, polisakarida, ion uyah, lan liya-liyane sing ngganggu reaksi PCR.Sing mbutuhake polimerase asam nukleat lan Campuran PCR ing sistem reaksi duwe resistensi lan adaptasi sing apik kanggo mesthekake kegiatan enzim lan akurasi replikasi ing kahanan sing kompleks.

Kalima, sampel jaringan sing ditargetake dening teknologi Direct PCR tanpa perawatan pengayaan asam nukleat lan jumlah cithakan cilik banget, sing mbutuhake sistem reaksi duwe sensitivitas lan efisiensi amplifikasi sing dhuwur banget.