Aku percaya yen saben wong bakal nemoni masalah kasebut nalika nindakake reaksi PCR, nanging umume bisa diklasifikasikake dadi rong masalah utama:

Kakehan amplifikasi cithakan gen (amplifikasi);
Kakehan amplifikasi gen non-target.
Nggunakake aditif minangka salah sawijining strategi umum kanggo ngatasi masalah kasebut.Biasane peran aditif duwe rong aspek:
struktur sekundersaka gen (struktur sekunder);
Ngurangi priming non-spesifik.
Dina iki, editor bakal ngenalake sampeyan aditif umum ing reaksi PCR lan fungsine.
Aditif sing nyuda struktur sekunder
sulfoksida(DMSO)
sampel genkanthi kandungan GC dhuwur.Nanging, DMSO uga nyuda aktivitas polimerase Taq.Mulane, saben wong kudu ngimbangi aksesibilitas template lan aktivitas polimerase.Editor nyaranake sampeyan bisa nyoba macem-macem konsentrasi DSMO, kayata saka 2% nganti 10%, kanggo nemokake konsentrasi sing cocog karo eksperimen sampeyan.
Deterjen non-ionik
Deterjen non-ionik, kayata 0,1-1% Triton X-100, Tween 20 utawa NP-40, biasane nyuda struktur sekunder DNA.Senajan iki bisa nambah amplifikasi gene cithakan, uga bakal nimbulaké alangan saka amplifikasi non-tartamtu.Dadi, aditif iki bisa digunakake kanthi apik kanggo reaksi PCR sing kurang ngasilake tanpa lebu, nanging ora apik kanggo reaksi PRC sing ora murni.Manfaat liyane saka deterjen non-ionik yaiku nyuda kontaminasi SDS.Biasane sajrone proses ekstraksi DNA, SDS bakal digawa menyang langkah PCR, sing banget nyegah aktivitas polimerase.Mulane, nambah 0,5% Tween-20 utawa Tween-40 kanggo reaksi bisa netralake efek negatif saka SDS.
Betaine_
Betaine bisa nambah amplifikasi DNA kanthi ngurangi tatanan struktur sekunder lan umume minangka tambahan "misteri" kanggo kit PCR komersial.Yen sampeyan pengin nggunakake betaine, sampeyan kudu sijine betaine utawa betaine mono-hidrat (Betaine utawa Betaine mono-hydrate), nanging ora betaine hidroklorida (Betaine HCl), nyetel kanggo konsentrasi final saka 1-1,7M.Betaine uga bisa ningkatake kekhususan amarga ngilangi ketergantungan komposisi pasangan basa saka leleh DNA/denaturasi DNA.
Aditif kanggo nyuda priming non-tartamtu
Formamide
Formamide minangka aditif PCR organik sing umum digunakake.Bisa gabungke karo alur utama lan alur suntingan ing DNA, saéngga nyuda stabilitas heliks ganda DNA master lan nyuda suhu leleh DNA.Konsentrasi formamide sing digunakake ing eksperimen PCR biasane 1% -5%.
Tetrametilamonium klorida( TMAC)
Tetramethylammonium chloride bisa ningkatake kekhususan hibridisasi (kekhususan hibridisasi) lan ningkatake suhu leleh DNA.Mangkono, TMAC bisa mbusak priming non-spesifik lan nyuda misbinding DNA lan RNA.Yen sampeyan nggunakakeprimer degenerasiing reaksi PCR, elinga nambah TMAC, sing umum digunakake ing konsentrasi 15-100mM.
Aditif Umum Liyane
Saliyane rong kategori aditif kasebut ing ndhuwur, ana akeh aditif umum ing reaksi PCR, sanajan padha duwe fungsi sing beda, nanging uga penting banget.
Ion magnesium
Ion magnesium minangka kofaktor (kofaktor) polimerase sing penting, yaiku, tanpa ion magnesium, polimerase ora aktif.Nanging, kakehan ion magnesium uga bisa mengaruhi efisiensi polimerase.Konsentrasi ion magnesium ing saben reaksi PCR bakal beda-beda.Agen chelating (kayata EDTA utawa sitrat), konsentrasi dNTP lan protein kabeh mengaruhi konsentrasi ion magnesium.Dadi, yen sampeyan duwe masalah karo eksperimen PCR, sampeyan bisa nyoba ngganti konsentrasi ion magnesium sing beda-beda, contone, saka 1.0 dadi 4.0mM, kanthi interval 0.5-1mM ing antarane.
Wigati dicathet yen pirang-pirang siklus beku-thaw bisa nyebabake stratifikasi konsentrasi larutan magnesium klorida.Mulane, sampeyan kudu dissolve sadurunge saben nggunakake, lan nyampur uga sadurunge nggunakake.
Albumin serum sapi(Bovine albumin, BSA)
Ing eksperimen kimia molekuler, albumin serum sapi minangka aditif sing umum banget, utamane ing pencernaan enzim restriksi lan eksperimen PCR.Ing reaksi PCR, BSA mbiyantu nyuda rereged kayata senyawa fenolik.Lan uga diarani bisa nyuda adhesi reaktan ing tembok tabung uji.Ing reaksi PCR, biasane konsentrasi BSA sing ditambahake bisa tekan 0,8 mg / ml.
 
Produk sing gegandhengan:
Pahlawan PCR(karo pewarna)
Pahlawan PCR