Pengarang: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Unit: Rumah Sakit Jiaozhou, Rumah Sakit Dongfang Berafiliasi karo Universitas Tongji

Saiki, jinis sampel utama kanggo deteksi asam nukleat patogen pernapasan yaiku swab tenggorokan.Ana akeh jinis solusi pengawetan sampel sing umum digunakake, kabeh kudu didinginkan utawa beku kanggo transportasi lan panyimpenan;Iku angel kanggo ngontrol kabeh proses suhu kurang sak proses koleksi lan transportasi, lan iku angel kanggo mesthekake kontrol kualitas sadurunge testing sampel^[1-2].

RNase (RNase) minangka endonuklease sing nghidrolisis RNA, utamane ngrusak ikatan fosfodiester antarane nukleotida.Molekul RNase stabil banget, ana ikatan disulfida ing struktur, lan aktivitase ora mbutuhake kation divalen, saéngga RNase ora gampang denaturasi, lan gampang renature sanajan sawise suhu dhuwur utawa nggunakake denaturant.RNases dipérang dadi endogen lan eksogen.RNases endogen bisa dibebasake bebarengan nalika sel pecah.Mulane, ngilangi peran RNases endogen minangka langkah kritis banget ing proses ekstraksi RNA.RNase eksogen disebarake kanthi akeh.RNase ana ing udhara, kulit manungsa, rambut lan idu, sing dadi alasan penting kanggo gampang degradasi RNA.^[3].

Pitakonan data

CANS-CL02-A009 "Aplikasi Kualitas Laboratorium Medis lan Pedoman Akreditasi Kompetensi ing Bidang Diagnosis Molekul" ing syarat teknis ngusulake supaya standar kualitas banyu sing cocog kudu dirumusake miturut aplikasi kasebut;Wadah kedap udara sekali pakai:

RNase / Klasifikasi

(1) RNase A

Ribonuclease A (RNase A), asalé saka pankreas sapi, minangka endoribonuklease sing bisa nyerang 3′ pungkasan residu pirimidin ing RNA, ngethok sitosin utawa urasil sing dibentuk saka nukleotida sing cedhak.Ikatan fosfodiester, produk pungkasan saka reaksi kasebut yaiku nukleotida pirimidin 3′ lan oligonukleotida kanthi nukleotida pirimidin 3′ ing pungkasan.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) asalé saka Aspergillus orjzae, khusus tumindak ing 3′-terminal fosfat guanin, lan situs cleavage antarane 3′ fosfat guanin lan 5′ hidroksil nukleotida jejer.Produk pungkasan saka reaksi kasebut yaiku fragmen asam 3′guanylic lan oligonukleotida kanthi asam 3′guanylic ing pungkasan.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) pisanan ditemokake saka jaringan timus anak sapi, lan gen enkoding wis dikloning dadi Escherichia coli.Bisa ngrusak DNA khusus: untaian RNA ing dupleks hibrida RNA, ngasilake oligonukleotida lan mononukleotida kanthi ujung 3′-OH lan 5′-monophosphate, ora bisa ngrusak DNA utawa RNA untai tunggal utawa ganda.

RNase

Fungsi lan nggunakake

Ribonuclease bisa ngangkat degradasi asam ribonukleat (RNA) lan bisa disintesis sacara artifisial.Salep obat digunakake kanggo nambani trauma lan nyeri sendi.Miturut lapuran, ribonuclease bisa ngowahi metabolisme sel inang, nyandhet sintesis virus, nyandhet proliferasi virus influenza in vitro, lan nyegah pembentukan virus vaccinia lan herpes ing embrio pitik.Panggunaan klinis ribonuclease injeksi intramuskular saben dina 180 mg, migunani kanggo perawatan epidemi encephalitis, ribonuclease bisa catalyze degradasi asam ribonukleat (RNA), lan saiki bisa disintesis sacara artifisial.Salep obat digunakake kanggo nambani trauma lan nyeri sendi.Miturut lapuran, ribonuclease bisa ngowahi metabolisme sel inang, nyandhet sintesis virus, nyandhet proliferasi virus influenza in vitro, lan nyegah pembentukan virus vaccinia lan herpes ing embrio pitik.Panggunaan klinis ribonuclease injeksi intramuskular saben dina 180 mg migunani kanggo perawatan ensefalitis epidemi.

RNase

Definisi Inhibitor

Definisi unit inhibitor RNase: Jumlah enzim sing dibutuhake kanggo nyandhet 50% aktivitas 5ng RNase A yaiku siji unit.

Cara Kerja Inhibitor RNase

Guanidine isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate minangka senyawa organik kanthi rumus molekul C2H6N4S.Utamane digunakake ing obat biologi, reagen kimia, lan liya-liyane. Guanidine isothiocyanate minangka agen lysing protein, lan asring digunakake minangka komponen utama larutan lisis ing reagen diagnostik molekuler.Bisa lyse jaringan, ngrusak struktur sel lan dissociate asam nukleat saka nukleoprotein, lan wis denaturation kuwat kanggo RNase.Iki minangka inhibitor RNase sing paling efektif saiki.

TRIzol minangka reagen ekstraksi RNA total novel sing bisa langsung ngekstrak total RNA saka sel utawa jaringan.Isine zat kayata fenol lan guanidine isothiocyanate, sing bisa kanthi cepet ngganggu sel lan nyegah nuklease sing dibebasake dening sel.

(Nanging, guanidine isothiocyanate mbebayani kanggo kesehatan peneliti lab.)

Rnasin:

Glikoprotein asam sing diekstrak saka ati tikus utawa blastoderm manungsa.Rnasin minangka inhibitor RNase non-kompetitif, sing bisa ngiket macem-macem RNase kanggo mateni.

(Rincian liyane: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hsuhu:

Suhu dhuwur uga minangka cara umum kanggo denaturasi protein.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC minangka inhibitor RNase sing kuwat nanging ora lengkap, sing bisa nyandhet aktivitas RNase kanthi gabung karo cincin imidazole asam amino saka gugus aktif RNase kanggo denaturasi protein.

Kompleks Vanadil ribonukleosida:

Komplek sing dibentuk dening ion vanadium oksida lan nukleosida, sing ngiket RNase ing wangun zat transisi, sing meh bisa nyandhet aktivitas RNase.

liyane:

SDS, urea, bumi diatomaceous, lan liya-liyane uga duwe efek nyegah tartamtu ing RNase.

Ulasan ahli

Li Yujie Kepala Teknisi

Direktur Departemen Laboratorium, Rumah Sakit Jiaozhou, Rumah Sakit Dongfang Berafiliasi karo Universitas Tongji

Kanggo nyegah biodegradasi RNase eksogen, topeng, sarung tangan lan topi kudu digunakake lan asring diganti sajrone proses ekstraksi RNA.Kabeh barang kaca kudu dipanggang ing oven pangatusan kanthi suhu 200 ° C luwih saka 2 jam.Bahan sing digunakake kanggo baking, kayata plastik, kudu diolah nganggo banyu DEPC, banjur dikumbah nganggo banyu suling.Reagen utawa piranti sing digunakake kanggo ekstraksi, pengawetan lan identifikasi RNA kudu darmabakti kanggo RNA, lan area operasi RNA independen kudu disiyapake.

referensi:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bakteri lan virus ing nasopharynx sanalika sadurunge wiwitan infeksi ambegan ngisor akut ing bocah-bocah Pribumi Australia [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Cabang Kontrol Infeksi Rumah Sakit Asosiasi Pengobatan Pencegahan Cina.Pedoman kanggo koleksi lan inspeksi spesimen mikroba klinis [J].Chinese Journal of Infeksi Rumah Sakit, 2018(20):3192-3200.

[3] "Tes Klinis Sepuluh Ewu Kenapa Volume Tes Biologi Molekuler"